إعداد وضع الأنسجة حاسة الشم الطرفية الجزيئية والتحليل المناعي في المورفولوجية

Summary

نقدم هنا، بروتوكولا للمرحلة وتشريح وضع الأنسجة حاسة الشم من الأنواع المورفولوجية . تشريح الأنسجة يمكن استخدامها في وقت لاحق للتحليلات الجزيئية، مثل كمية RT-PCR (عكس النسخ-البلمرة المتسلسل) أو الحمض النووي الريبي التسلسل (رناسيق)، فضلا عن التحليلات في فيفو مثل إيمونوهيستوتشيميستري أو في الموقع التهجين.

Abstract

نظام حاسة الشم المورفولوجية نظام يستخدم على نطاق واسع في بيولوجيا الأعصاب التنموي ونظم علم الأعصاب، وكذلك العصبية والسلوك وتطور السلوكية. بيت المورفولوجية حاسة الشم أنسجة الخلايا العصبية مستقبلات الشم (أورنس) التي كشف الإشارات الكيميائية المتطايرة بالإضافة إلى الخلايا العصبية الحسية الطاقة المائية والحرارية. في هذا البروتوكول، يصف لنا التشريح لتطوير النسيج حاسة الشم الطرفية من الأنواع المورفولوجية الكبار. أولاً نحن تصف كيفية المرحلة واليرقات المورفولوجية ، متبوعاً بتشريح القرص باللوامس من المراحل المبكرة الخوادر، متبوعاً بالتشريح للهوائيات من مراحل منتصف الخوادر والكبار في السن. نعرض أيضا الأساليب التي يمكن أن تستخدم في الأعمال التحضيرية في التقنيات الجزيئية، مثل استخراج الحمض النووي الريبي لبكر قرة أو رناسيق أو إيمونوهيستوتشيميستري. يمكن أيضا تطبيق هذه الأساليب للأنواع المورفولوجية الأخرى بعد يتم تحديد أوقات التنمية الخوادر إبلاغها، وتحسب كل المراحل للشيخوخة المناسبة.

Introduction

نظام حاسة الشم المورفولوجية نظام يستخدم على نطاق واسع في بيولوجيا الأعصاب التنموي ونظم علم الأعصاب، وكذلك العصبية ودراسات السلوك وتطور السلوكية^{1،2،3، 4}. البيت المورفولوجية حاسة الشم أنسجة الخلايا العصبية مستقبلات الشم (أورنس) التي كشف الإشارات الكيميائية المتقلبة بالإضافة إلى^5،1،الخلايا العصبية الحسية الطاقة المائية والحرارية⁶. والهدف العام من هذه المخطوطة شرح كيفية المرحلة وتشريح وضع الأنسجة حاسة الشم الخوادر والكبار في الأنواع المورفولوجية . والأساس المنطقي لهذا الأسلوب لتوليد عينات من مختلف مراحل الخوادر للتحليلات الجزيئية والإنمائية نظام حاسة الشم الطرفية، مثل رناسيق والكمية الرايت-بكر، بالإضافة إلى ذلك في فيفو الأنسجة وسم تقنيات . يمكن أن يكون هذا الأسلوب مفيداً بشكل خاص لتحديد القوى المحركة للملامح النسخي في تطوير نظام حاسة الشم الكبار من الأنواع غيرmelanogaster المورفولوجية ، والتي لا تملك جميع الكواشف المحورة وراثيا لنوع معين من الخلايا التالي والتحليلات. في هذه المخطوطة، نظهر كيفية تشريح أقراص باللوامس وهوائيات من الأنواع المورفولوجية الخوادر والكبار. أولاً، نحن إظهار كيفية تحديد المورفولوجية ح 0 لتشكيل بوباريوم (الإدارة العامة الاتحادية، الخوادر بيضاء أو بريبوباي) لانطلاق التنمية والشيخوخة إبلاغها. وبعد ذلك، نعرض كيفية تشريح أقراص باللوامس والجزء الثالث باللوامس؛ على وجه التحديد، كيف أن ننأى بها عن القرص العين والجزء الثاني باللوامس لنقاء الأنسجة المطلوبة من أجل رناسيق أو RT-تقارير إتمام المشروعات. مراحل melanogaster دال- المبينة في هذا البروتوكول على نحو يتوافق مع القرص باللوامس منقوشة مسبقاً (بريبوباي)، اختيار السلائف من باللوامس القرص (ح 8 APF)، بداية التفريق بين الطرفي أورنس (ح 40 الاتحادية)، و هوائي الكبار. وأخيراً، نعطي أمثلة عن RT-PCR كمي من هوائيات الكبار معزولة باستخدام الأسلوب، و في فيفو إيمونوهيستوتشيميستري. يمكن استخدام هذا الأسلوب لتوليد عينات لتحليل الحمض النووي الريبي/الحمض النووي و immunohistochemistry على تطوير أنسجة حاسة الشم الطرفية من الأنواع المورفولوجية المختلفة.

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Protocol

البروتوكول التالي ينسجم مع المبادئ التوجيهية الأخلاقية التي وضعتها "لجنة أخلاقيات البحوث جامعة ديوك".

1-إعداد الأنسجة والتدريج التنموية لعذراء melanogaster المورفولوجية

1. أولاً، تحديد كم عدد الذباب سيكون ضروريا للتشريح. RT-PCR ورناسيق، جمع 100-200 أقراص باللوامس وهوائيات من الأفراد التي ضرورية في مراحل بريبوبال، ح 8 الإدارة العامة الاتحادية، ح 40 الإدارة العامة الاتحادية، والكبار. ل immunohistochemistry، تشريح الفرد 10-20.
2. تنظيف جميع المواد، بما في ذلك منصات التشريح والملقط، استخدام مناديل مع 70% EtOH. إذا كانت المواد تشريح لاستخدامها لاستخراج الحمض النووي الريبي وتنظيف كل شيء مع نيوتراليزيرس رناسي وجعل جميع الحلول باستخدام أما نوكلاس خالية أو ثنائي إثيل بيروكاربوناتي (ديبك) المياه المعالجة.
   ملاحظة: يستخدم هذا البروتوكول منصات تشريح السيليكون بدلاً من الزجاج لتشريح. منصات السيليكون الودية إلى الملقط غرامة فائقة وتشجيع تشريح سريعة وعالية الجودة.
3. جمع عذراء في ح 0 المرحلة APF/بريبوبال.
   1. لضمان تنظيم الأكثر دقة، رصد اليرقات في 30 دقيقة لفترات ح 1.
      ملاحظة: سوف يرجح أن بوبات تجول اليرقات الطور الثالث في زجاجة متوسطة مزدحمة في غضون ساعات قليلة.
   2. متى اليرقات تصبح غير متحرك ومحاطة بقضية الخوادر ملونة (أبيض تقريبا) خفيفة جداً، تحويلها إلى صغيرة 2-في طبق بتري مع ورقة رطبة بالتصفية.
   3. تستمر ح 1-2، أحياناً رصد وتحديد ونقل بريبوباي.
      ملاحظة: بدلاً من ذلك، مسح زجاجة الخوادر لكل والسماح لليرقات إلى وضع من أجل ح 2. الخوادر لكل تجمع بعد ح 2 سوف تكون داخل نطاق الإدارة العامة الاتحادية ح 2 0.
4. فورا الانتقال إلى الخطوة 3.1 تشريح القرص باللوامس بريبوبال لمرحلة APF ح 0. إذا كان بريبوبا يحتاج إلى أن يكون الذين تتراوح أعمارهم بين، جمع لهم في طبق وتغطي الطبق ومكان فيلم بارافين حول الحواف تمنع جفاف ومكان طبق بيتري عند 25 درجة مئوية.
   ملاحظة: يمكن أن يكون عمر الخوادر الآن إلى اكلوسيون.
5. الخوادر التي تم جمعها في مجموعة ح 2، عمر بريبوباي ح 2 أقل من العمر المطلوب لبغية ضمان أن الخوادر لا الفائض.
6. استخدام الملقط فائقة غرامة (دومون 55) كما الأنسجة صغيرة جداً وهشة.

2-الأنسجة إعداد والتدريج التنموية من عذراء من الأنواع المورفولوجية الأخرى

1. لتحديد طول تطور الخوادر في الأنواع المورفولوجية الأخرى، وضع العينات في درجة الحرارة المثلى، وتسجيل التواريخ عندما يلاحظ بريبوباي وفرزها في قنينة جديدة وتسجيل عدد الأيام من بريبوبا إلى مرحلة البلوغ.
2. سجل نسبة الوقت للتنمية الخوادر للأنواع غيرميلانوجاستير و ميلانوجاستير. مضاعفة نسبة الوقت التنموية بعدد الساعات المستخدمة لتنظيم ميلانوجاستير للحصول على عدد الساعات الأنواع غيرميلانوجاستير في السن.

3-تشريح "القرص باللوامس الخوادر" melanogaster دال

ملاحظة: جميع الأوقات الشيخوخة والبروتوكولات تشريح موصوفة ل melanogaster المورفولوجية. إدخال تعديل على البروتوكول الشيخوخة استناداً إلى النقاط الزمنية الإنمائية إبلاغها لجميع الأنواع الأخرى، سوف تكون المطلوبة، كما هو موضح أعلاه.

1. لتشريح القرص باللوامس الخوادر، جمع 50-100 0-2 h أو h 6-8 الخوادر القديمة باستخدام ملعقة ووضعها على لوح تشريح.
2. "الماصة؛" 150 ميليلتر من الجيش الملكي النيبالي العزلة الحل في رناسي الحرة 1.5 مل [ميكروفوج] الأنبوبة باستخدام ماصة 200 ميليلتر ووضع الأنبوب على الجليد.
3. تشريح الخوادر في 150-200 ميليلتر من برنامج تلفزيوني 1 x (الفوسفات مخزنة المالحة، خالية من نوكلاس). ضع عدة قطرات من برنامج تلفزيوني (150-200 ميليلتر كل قطره) على لوح التشريح.
4. على لوح التشريح، ضع 0-ح 2 أو 6-8 ح سن الخوادر (عذراء واحدة كل قطره ماء) أن تشريح في واحدة من 1 × قطرات PBS. استخدام الملقط في يد واحدة لتحقيق الاستقرار في الجسم.
5. 0-ح 2 سن الخوادر، استخدام الملقط في ناحية أخرى، عقد في الجزء الأمامي الأكثر (هوكس الفم) من بريبوبا وسحب لفضح العقول وأقراص إيماجينال شاسيه الخوادر الأمامي.
6. الخوادر APF ح 8، أولاً بلطف قشر خارج القضية الخوادر من الربع الأمامي أكثر من عذراء، تعريض رأسه داخل كيس الغشاء الذي يحيط الجسم.
   ملاحظة: الجسم، وفي هذه المرحلة، تبدو مثل يرقة تردي.
7. إزالة الرأس في الرقبة المشتركة.
   ملاحظة: وهذا ما يضمن أن أقراص باللوامس لن تكون فقدت، في هذه المرحلة ترتبط أساسا بالفصوص البصري للدماغ.
8. نقل الأنسجة مع العقول وأقراص إيماجينال إلى آخر 1 × الحبرية PBS باستخدام الملقط أو ماصة 20-ميليلتر.
9. تحديد القرص العين باللوامس متصل بالدماغ في الفصوص البصرية. استخدام الملقط، قطع اتصال القرص باللوامس العين من الدماغ، وقضية الخوادر. أنه نقل إلى 1 جديدة x الحبرية PBS باستخدام الملقط أو ماصة 20-ميليلتر.
   ملاحظة: القرص العين باللوامس بريبوبال نسيج مسطح. ومع ذلك، قبل الخوادر ح 8، أقراص العين يتم استدارة الحجامة أقراص باللوامس، الذي يجلس عرفت الدماغ المركزي.
10. باستخدام الملقط، قطع الأنسجة في موقع اتصال بين العين والقرص باللوامس. استخدام ماصة 20-ميليلتر نقل تشريح الأنسجة بلطف إلى الكاشف الحل عزل الحمض النووي الريبي. تقليل كمية السائل نقل بواسطة بيبيتينج مبلغاً صغيراً قدر الإمكان.
11. كرر حتى قد تم تشريح جميع الخوادر.

4-تشريح melanogaster دال- منتصف-الخوادر و "هوائيات الكبار"

ملاحظة: قبل 40 ح الإدارة العامة الاتحادية، أغلبية التحول الكامل، وهياكل الكبار أصبحت واضحة، ولكن لا تزال بيضاء ولا يوصف. عند هذه النقطة من الوقت التنموية، الهوائي الكبار قد اتخذت شكلها النهائي حتى الآن لا يزال يتسم بالشفافية والغالبية مستقبلات الشم، باستثناء عدد قليل، لم تكن قد بدأت التعبير.

1. لتشريح باللوامس الخوادر، جمع 50-100 بريبوباي كما هو موضح في الخطوة 1 ومنهم لسن 40 ح عند 25 درجة مئوية.
2. بيبيت 150 ميليلتر من الجيش الملكي النيبالي العزلة الحل في ميكروسينتريفوجي 1.5 مل رناسي حرة الأنبوبة باستخدام بيبيت 200 ميليلتر ووضع الأنبوب على الجليد.
3. على لوح التشريح، ضع عذراء أن تشريح إلى واحد (1) x قطرات PBS. استخدام الملقط في يد واحدة لتحقيق الاستقرار في الجسم. استخدام الملقط في ناحية أخرى، بلطف تقشر القضية الخوادر من الربع الأمامي أكثر من عذراء، تعريض رأسه داخل كيس الغشاء الذي يحيط الجسم.
4. استخدام الملقط، بعناية قطع الرأس عن باقي الجسم الخوادر بالضغط بالجسم مع مجموعة واحدة من الملقط وتمزيق الرأس في الرقبة مشتركة مع مجموعة أخرى من الملقط. بلطف نقل الرأس إلى آخر 1 × الحبرية PBS باستخدام الملقط. "الماصة؛" صعودا وهبوطاً لتنظيف محتويات الرأس (الدماغ، إلخ) للحصول على غشاء واضحة التي استخدمت لتطويق الرأس المورفولوجية النامي.
   ملاحظة: في 40-50 ح الإدارة العامة الاتحادية، ترتبط الهوائيات للقسم الأمامي معظم الغشاء. وسوف تصبح الظاهر لتشريح عندما يتم مسح محتويات الرأس مع بيبيتينج.
5. استخدام الملقط، قطع هوائيات الخوادر من الغشاء. قم بفصل الجزء 2^nd الهوائي من 3^rd استخدام الملقط لشريحة القطاعي المشترك، كما سيضم فقط الجزء 3^rd الخلايا العصبية مستقبلات الشم.
6. استخدام ماصة 20-ميليلتر نقل تشريح الأنسجة بلطف إلى الكاشف الحل عزل الحمض النووي الريبي. تقليل كمية السائل نقل بواسطة بيبيتينج مبلغاً صغيراً قدر الإمكان. كرر حتى قد تم تشريح جميع الخوادر.
7. لتشريح باللوامس الكبار، جمع ما يقرب من 50 البالغين ومنهم لسن اكلوسيون بعد أسبوع.
   ملاحظة: التعبير عن الجينات مستقبلات الشم وجينات أخرى ذروة أسبوع بعد اكلوسيون. تتراوح أعمارهم بين الكبار لمدة أسبوع للتأكد من الجينات ذات الصلة بيولوجيا مع النصوص وفرة منخفضة الارتفاع فوق عتبة الكشف.
8. لاستخراج الحمض النووي الريبي، تشريح الذباب في حين أنهم ما زالوا أحياء على لوح₂ CO. التعامل مع لوحة المفاتيح₂ CO مع مثبطات رناسي. لتصوير [كنفوكل]، تشريح الذباب على لوح تشريح في 1 × برنامج تلفزيوني أو برنامج تلفزيوني + 0.2% تريتون.
9. أولاً، وضع الكبار على النوم على لوح محطة₂ CO تحت نطاق التشريح. على منصة محطة₂ أول أكسيد الكربون، باستخدام الملقط في يد واحدة لتحقيق الاستقرار في الجسم، واستخدام الملقط في اليد الأخرى بلطف سحب/رشة خارج باللوامس الجزء الثالث من الدورة الثانية.
10. نقل الهوائيات في حل عزل الحمض النووي الريبي، استخدام الملقط لوضع الهوائيات مباشرة في السائل. كرر حتى قد تم تشريح جميع البالغين.
    ملاحظة: تأكد من أن الهوائيات مغمورة في محلول عزل الحمض النووي الريبي. قد تصبح عالقاً الهوائيات على جانب الأنبوب. هذا سوف يتسبب تدهور المتزايد للجيش الملكي النيبالي، الحد من كمية ونوعية الجيش الملكي النيبالي.
11. مباشرة الشروع في استخراج الحمض النووي الريبي أو وضع الأنبوب في-80 درجة مئوية للتخزين على المدى الطويل.

5-الجيش الملكي النيبالي في معزل عن تشريح الأنسجة

1. إزالة جميع العينات من التخزين-80 درجة مئوية وذوبان الجليد لهم على الجليد.
2. باختصار تدور (5-6 ق، ~ 6,000 س ز) كل عينة لجمع المواد في الجزء السفلي من الأنبوب.
3. طحن كل عينة باستخدام مدقة بلاستيك يعقم ومحرك كهربائي لمدة 10 ق على الجليد.
4. كرر الخطوات 5-2 و 5.3 4.
5. القيام باستخراج الحمض النووي الريبي استخدام مجموعات المتاحة تجارياً وعقب بروتوكولات الشركة المصنعة لعائد أمثل.
6. أداء qRT-PCR باستخدام الكواشف المتوفرة تجارياً والإشعال محددة ضد الجينات من اهتمام وعقب البروتوكولات الخاص بالشركة المصنعة.
   1. الاضطلاع بجميع ردود الفعل بكر استخدام الشروط التالية: تمسخ 95 درجة مئوية لمدة 10 دقائق تليها دورات 40 من 95 درجة مئوية لمدة 15 ثانية، 55 درجة مئوية لمدة 30 s، و 60 درجة مئوية لمدة 30 ق.
      ملاحظة: أزواج التمهيدي للجينات وتراجع و الديمقراطية هي المدرجة في الجدول 1، ويتم سرد كبسولة تفجير للجينات مستقبلات الشم في هيوستن CE et al. ⁸.

6-تثبيت الأقراص باللوامس الخوادر وهوائيات إيمونوهيستوتشيميستري

ملاحظة: إصلاح الأنسجة في دفعات من 10-20 الأفراد لضمان الأنسجة ثابتة لنفس المقدار من الوقت. تصغير مقدار الوقت العينات البقاء في PBT (برنامج تلفزيوني مع المنظفات) قبل نقلهم إلى مثبت تحقيق أقصى قدر من السلامة للأنسجة.

1. جمع أقراص باللوامس تشريح أو هوائيات الخوادر في أنبوب بكر 200 ميليلتر تحتوي على 200 ميليلتر من 0.2% PBT على الجليد للمحافظة على سلامة الأنسجة، وتجنب العينة من الالتصاق بالجدار من بكر 200 ميليلتر الأنابيب التي ستؤدي إلى تثبيت غير مكتملة.
   ملاحظة: هوائيات الخوادر وأقراص باللوامس يمكن أن يكون صعباً أن نرى أنها شفافة تماما. من المستحسن استخدام نطاق تشريح لجميع خطوات الغسيل للحيلولة دون فقدان أي من الأنسجة. بدلاً من ذلك، قد تكون لوحات تيرازاكي 96-جيدا المصبوغة لتعقب أفضل الأنسجة ويستخدم لتثبيت البرنامج.
2. إصلاح القرص باللوامس تشريح وعينات باللوامس الخوادر في حوالي 200 ميليلتر من 4 في المائة من منهاج عمل بيجين (بارافورمالدهيد) لمدة 30 دقيقة في درجة حرارة الغرفة. لهذا وبعد ذلك تبقى الخطوات، الأنابيب مع العينات على نوتاتور لخلط العينات في الحل بشكل صحيح. التقدم إلى الخطوة 6.7.
3. للهوائي الكبار، وتشريح الرأس كله أولاً وإصلاحه في حوالي 200 ميليلتر من 4% (بارافورمالدهيد) من منهاج عمل بيجين ح 1 في درجة حرارة الغرفة.
4. أغسل x 3 مع 200 ميليلتر من 0.2% PBT لمدة 10 دقائق. تبقى العينات على نوتاتور خلال الاحتضان.
5. أن نعود إلى مجهر تشريح لتشريح أدق الجزء الثاني المتعلق باللوامس من الرؤساء الثابتة. استخدام الملقط لتحقيق الاستقرار في الرأس، بلطف سحب/رشة خارج باللوامس الجزء الثالث من الدورة الثانية.
6. نقل قطاعات باللوامس الثالث تشريح إلى حوالي 200 ميليلتر من 4% منهاج العمل (بارافورمالدهيد) وإصلاحها لمدة 30 دقيقة في درجة حرارة الغرفة.
7. أغسل x 3 مع 200 ميليلتر من 0.2% PBT لمدة 10 دقائق. تبقى العينات على نوتاتور خلال الاحتضان.
8. تخزين العينات في 4 درجات مئوية أو تواصل مباشرة مع كامل جبل إيمونوهيستوتشيميستري.
   ملاحظة: قد تتغير كفاءة تلطيخ عندما يتم استخدامه الضد. ينبغي أن يكون هذا الأسلوب الأجسام المضادة المناسبة لأقل علامات البروتين وفيرة أو الأضعف. ومع ذلك، في بعض الأحيان، قد يتطلب الأمثل للبروتوكول (الهوية أو مقدار مثبت أو وقت التثبيت).

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

النتائج

تشريح الأنسجة حاسة الشم النامية يمكن استخدامها لاستخراج الحمض النووي الريبي تليها RT-PCR لتقييم التعبير الجيني أو يمكن اتخاذها من خلال بروتوكولات immunohistochemistry لتحديد نمط التعبير، والتعريب الخلوية الفرعية من جينات الفائدة. في هذا القسم، نقدم نتائج تمثيلية من أما بروتوكول.

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Discussion

هذا البروتوكول مورد مفيد لمختبرات المهتمة في تحديد البرامج الوراثية والنسخي العاملة في تطوير أنسجة حاسة الشم المورفولوجية ، فضلا عن إجراء تحليل مقارن لهذه البرامج عبر المورفولوجية الأنواع. أنها مفيدة بشكل خاص إذا كانت هناك حاجة ملامح نظم المستوى النسخي من مراحل إنمائية مختلفة ...

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Materials

Name	Company	Catalog Number	Comments
10X Phosphate-buffered Saline	Gibco	70011-044	Dilute to 1X in RNase free water
CO2 tank	Air Gas	CD R200
Two sharp forceps (Dumont #55)	Fine Science Tools	11255-20
Trizol	Invitrogen	15596-026	RNA isolation solutions
Dissecting Microscope
Small bucket with ice
P20 and P200 micropipettes and tips
1.7 mL Microfuge tubes			Purchase nuclease free for best results
0.2 mL PCR tubes
Paraformaldehyde powder	Polysciences	380
10% Triton X-100	Teknova	T1105	Dilute to 0.2% v/v in 1X PBS
2" petri dishes
55mm filter paper	Whatman	1001-055	Wet with water and place in a petri dish to keep pupae moist
25 C incubator
deionized H2O			Purchase nuclease free or treat with DEPC
Sylgard 184 Silicone Elastomer Kit	Dow Corning		to be used for making dissection pads from Terizaki plate covers.
MicroWell Mini Trays with lids	Nunc	438733	Lids can be used to make silicone dissection pads
Rabbit anti-GFP antibody	MBL international corpor	PM005	primary antibody
Mouse anti RAT CD2	AbD seroTec	MCA154RHDL	primary antibody
ADL195 (anti lamin, mouse)	Dev studies hydoma ban	ADL195-s	primary antibody
Alexa Fluor® 488 goat anti-rabbit IgG (H+L)	invitrogen	A11008	Secondary antibody
Cy3 Goat Anti-Mouse IgG	Jackson ImmunoResearch	115-166-003	Secondary antibody
Triton X-100, Protein Grade Detergent, 10% Solution, Sterile-Filtered	CALBIOCHEM	648463	detergent
Lab Rotator	Thermo scientific		Rotator
Nuclease Free Water	Growcells.com	NUPW-0125	Water
Light-Duty Tissue Wipers	VWR	82003-822	For cleaning dissection supplies
Superscript II	invitrogen	18064014	Reverse Transcriptase
QIAshredder (50)	RNA extraction	QIAGEN	79654
Oligo(dT)12-18 Primer	RT	life technologies	18418012
RNeasy MinElute Cleanup Kit (50)	RNA extraction	QIAGEN	74204
FASTSTART UNIV SG MASTER (5 ML)(500 RXN)	qPCR	Roche	04913850001
FASTSTART ESSENTIAL GREEN DNA MASTER	qPCR	Roche	06402712001
LIGHTCYCLER 480 - MULTIWELL PLATE 96	qPCR	Roche	04729692001
NEBNext High-Fidelity 2X PCR Master Mix	qPCR	NEB	M0541S