تجلط الشريان السباتي الكلاب المستحثة بكلوريد الحديد: نموذج حيوان كبيرة لإصابة الأوعية الدموية

Summary

نقدم هنا، بإدخال التعديلات اللازمة لتتسم جيدا واستخداما حيوانية المستحثة بكلوريد الحديد (فيكل₃) شريان السباتي ضرر نموذج صغير للاستخدام في نموذج إصابة الأوعية الدموية حيوانية كبيرة. ويمكن استخدام النموذج الناتج لتقييم المحاكمة قبل الإكلينيكية للتدخلات الدوائية والميكانيكية الوقائية وثرومبوليتيك على حد سواء.

Abstract

تجلط الدم الشرياني الانسداد مما يؤدي إلى السكتة الدماغية الدماغية واحتشاء عضلة القلب ويساهم 13 مليون حالة وفاة كل سنة على الصعيد العالمي. هنا، نحن قد ترجمت نموذج إصابة الأوعية الدموية من حيوانات صغيرة إلى الحيوانات كبيرة (الكلاب البوليسية)، مع تعديلات طفيفة يمكن استخدامها لفحص ما قبل السريرية من العوامل الوقائية وثرومبوليتيك. بالإضافة إلى الطرق الجراحية، يصف بروتوكول تعديل الأساليب خطوة بخطوة تقييم كاناليزيشن الشريان السباتي عن طريق تصوير الأوعية، تعليمات مفصلة لمعالجة كل من الدماغ والشريان السباتي للتحليل النسيجي للتحقق من السباتي كاناليزيشن ونزيف في المخ، ومعايير محددة لإكمال تقييم الأحداث انصماميه المتلقين للمعلومات باستخدام الرنين المغناطيسي التصوير (التصوير بالرنين المغناطيسي). وبالإضافة إلى ذلك، تناقش التغييرات الإجرائية المحددة من طراز الحيوانات الصغيرة سابقا الراسخة اللازمة لترجمة لإصابة الأوعية الدموية في الحيوانات كبيرة (الكلاب).

Introduction

إلى حد كبير على غرار العلاج السكتة الدماغية بعد علاج أمراض الشريان التاجي، أساسا لأن التدخلات في أمراض القلب والأوعية الدموية قد استجابت جيدا للعقاقير والعلاج واللمفاوية التدخلات¹. ومع ذلك، هذه العلاجات، لم تترجم بنجاح إلى احتشاء دماغي. الصعوبات مع علاج السكتة الدماغية الحالية هي أنه لا يمكن عكس منشط البلاسمينوجين الأنسجة المؤتلف (رتبا)، وأن الإدارة يحمل خطرا كبيرا من 6.4 في المائة للتحويل النزفية^{2،3، 4}-الوفيات والمراضة الناجمة عن ذلك يحد من استخدامه إلى نافذة صغيرة، وغالباً ما لا يمكن تحقيقه⁵. أيضا، ريستينوسيس وانسداد تحدث غالباً بعد ثرومبوليسيس الأولى، عكس تحسن العصبية الأولية. وباختصار، هناك نافذة زمنية ضيقة لإدارة رتبا يستبعد الغالبية العظمى (~ 90%) من المرضى الذين يعانون من السكتة الدماغية الوعائية الشتائم.

دور العلاج عن طريق الحقن الوريدي الصفيحات قد أظهرت وعد في علاج السكتة الدماغية مع إعادة الاستقناء السفينة محسنة، والبقاء على قيد الحياة والنتيجة². للأسف، هذه الأدوية لها أثر جانبي يمكن التنبؤ بها من نزيف في الجمجمة داخل وخارج الجمجمة، إلى حد كبير لأنه يوجد بأي حال من الأحوال على نحو كاف عكس أو السيطرة على النشاط². بينما فعالة في منع تراكم الصفائح الدموية وحالت خطر النزف وعدم القدرة على عكس نشاطهم على استخدامها في الروتين رعاية مرضى السكتة الدماغية. وبالتالي، ثمة حاجة، للمخدرات antithrombotic القوية التي تعمل وحدها أو في مجموعات لمنع وجلطات بعد يكون ملف تعريف أمان التي سوف تسمح باستخدام في مساحة مغلقة، وانخفاض حجم مثل الدماغ، ويتسامح فيها نزيف سيئة.

فهم إليه تجلط الدم الشرياني وتضيق re، وتقييم ثرومبوليتيكس والأدوية التي تمنع إعادة-تضيق، يتطلب نماذج الحيوانات الصغيرة والكبيرة على حد سواء كجزء من تطوير العقاقير قبل الإكلينيكية. إصابة الأوعية الدموية التي يسببها كلوريد الحديد هو تقنية مستخدمة على نطاق واسع لتشكيل الجلطات في الأوعية الدموية تتعرض للفئران، الجرذان، خنازير غينيا، الحث على سرعة ودقة والأرانب^6،،من^{78، 9 , 10 , 11 , 12}-هذه الأنواع الأصغر حجماً تقدم العديد من المزايا بما في ذلك سهولة التلاعب بالجينات وشراء الحيوانات غير مكلفة، وانخفاض تكاليف بدل السكن. ولسوء الحظ، ينفي التجارب على الحيوانات الصغيرة متعددة وتوجه الدم أثناء عملية جراحية للوصول الصفيحات مفاعليه وتحليل غازات الدم والاستجابة الالتهابية. الأهم من ذلك، تقليد الحيوانات الكبيرة أوثق الصفائح الدموية البشرية فسيولوجيا^6،13. نموذج إصابة الشريان السباتي₃ فيكل لعبت دوراً الغالبة في دراسة الفسيولوجيا المرضية تجلط الدم وفي التحقق من صحة رواية العقاقير المضادة الصفيحات والمضادة تخثر، وفي اكتشاف المحتملة ثرومبوليتيكس^{6 , 7 , 8 , 9 , 10 , 11 , 12}. السابق نماذج في الفئران، خنازير غينيا، الجرذان، والأرانب قدمت السهولة والمرونة للتلاعب بالجينات، ولكن النماذج القابلة للترجمة قبل الإكلينيكية ذات الأهمية الحاسمة لدراسات الجرعات وسمية المريض للعلاجات المحتملة^{6 ،13}. على الرغم من أن تم تطوير نماذج عدة من الاضطرابات الخثاريه في الفئران، كبير نماذج حيوانية تجلط الدم التي تنطبق على أمراض الأوعية الدموية المحيطية، والسكتة الدماغية واحتشاء عضلة القلب قليلة وبعيدة. نماذج تجلط الدم الأول في القرود والكلاب والخنازير وركزت على تضيق، تطبيق هيموستاتس واسطوانات لاحق على السفن، ويشيع أسفر عن تدفق دوري تخفيضات^14،،من¹⁵¹⁶. بدلاً من خثرة انسداد في موقع الضرر غشائي كما هو الحال في الطراز كلوريد الحديد، أسفرت عن دوري تجلط الدم، الانصمام القاصي خثرة في هذه النماذج والعودة إلى تدفق الدم الطبيعي. وبالمقارنة، النموذج كلوريد الحديد تعديل هنا في الحيوانات كبيرة، النتائج في خثرة انسداد في موقع الإصابة وهو استقرت والتحقق من الأوعية قبل العلاج ثرومبوليتيك. شرط أن يكون المحقق قد الأموال وافرة لكل المصروف اليومي وشراء الأنياب والخبرة الجراحية الكافية، ونحن التفصيل هنا نموذج كلاب كبيرة لإصابة الأوعية الدموية للسماح بمختبرات لدراسة تجلط الدم الاستفادة من العمليات الجراحية، والتصوير والنسيجي تقنيات.

Protocol

التحقيقات وصف تتوافق مع المبادئ التوجيهية لرعاية واستخدام الحيوانات المختبرية "المعاهد الوطنية للصحة"، وقد أقر ولاية أوهايو الدولة جامعة المؤسسية الحيوان الرعاية واستخدام اللجنة (#2015A00000029). وأجريت جميع المعالجات الجراحية تحت التخدير العميق والحيوانات لا تجربة الألم في أي مرحلة أثناء الإجراء. كانت جميع التجارب وصف غير الانتعاش.

1-إعداد

1. إعداد طازجة 50 مل كلوريد الحديد (فيكل₃) 50% (w/v) المخفف في المياه..
2. قطع الحبل السري الشريط إلى قطع 5.5 سم ونقع في الحل₃ فيكل 50% طازجة 1 أسبوع قبل الإجراء.
   ملاحظة: الشريط الحبل السري تستخدم سميكة ويحتاج إلى بعض الوقت ﻻستيعاب الحل₃ فيكل 50%.
3. بسرعة كل الكلاب بين عشية وضحاها قبل الجراحة.
4. قم بتسمية كريوفيالس لجمع البلازما والبول، وأنابيب الطرد المركزي العقيمة 50 مل لكل جهاز التخزين، وحاويات الفورمالين 10% للدماغ والسباتي تثبيت لتلطيخ ح & ه مع تحديد الحيوان، وتاريخ الميلاد، وتاريخ الجراحة، والعلاج.
5. إعداد 100 مل لكل حل لكل إجراء الكلاب: الفورمالين بارافورمالدهيد 4 ٪ في الفوسفات مخزنة المالحة (درجة الحموضة 7.4)، 10% محايدة مخزنة، وكلوريد 2,3,5-تريفينيلتيترازوليوم 2% [عقاري في برنامج تلفزيوني (درجة الحموضة 7.4)، تخزين في الظلام].
6. الحصول على النتروجين السائل وافرة لجميع كريوفيالس وأنابيب الأنسجة 50 مل لفلاش تجميد ليوم الإجراء.
7. الحصول على اثنين خراطيش ADP/الكولاجين مفاعليه الصفيحات PFA-100 (محلل وظيفة الصفائح الدموية) لكل الكلاب لكل نقطة الوقت للفائدة.
8. الحصول على 4.5 مل سترات صوديوم الدم جمع أنبوب واحد، لكل رسم الدم قبل التضحية، لفصل البلازما والتخزين. تضحية، رسم 16 أنابيب جمع الدم لتخزين البلازما. بعد كل أنبوبة جمع الدم كامل، تدور في 4,000 ز خ ل 30 s لعزل البلازما الغنية الصفيحات ونقل مسح طبقة في كريوفيالس. فلاش التجميد في النيتروجين السائل قبل التخزين في-80 درجة مئوية.
9. الحصول على 4.5 مل الليثيوم الهيبارين الدم جمع أنبوب واحد، لكل نقطة الوقت PFA-100 التي تهم مفاعليه الصفيحات السجل. في كل رسم الدم، إدخال 800 ميليلتر من الدم كله من أنابيب جمع دم الهيبارين ليثيوم في كل خرطوشة ADP/الكولاجين دون فقاعات الهواء لمتابعة مفاعليه الصفائح الدموية.
10. الحصول على أنابيب جمع الدم K3 يدتا اثنين (1.8 ملغ يدتا اللامائى كل 1 مل دم)، لتعداد الدم الكامل (CBC) عند خط الأساس، وفي وقت التضحية.
    ملاحظة: هذا المجلد مناسبة لمعظم المرافق الأساسية تشغيل كل مرتين في حالة خطأ ميكانيكي. المحققين على الرغم من أن تم تشغيلها CBC في كل خط الأساس قبل الإصابة ووقت التضحية، يمكن إضافة المزيد من الدم وتوجه كالموافق عليها في البروتوكولات الملحقة بها للحيوان لإجراء تحاليل إضافية. راجع المرفق فيما يتعلق بوحدات التخزين ومتطلبات التسليم لمعداتهم.
11. تحضير حقنه هيبارينيزيد 2 مل بملء وطلاء المحاقن يوم الإجراء لتحليل غاز الدم في وقت التضحية.
    ملاحظة: راجع المرفق فيما يتعلق بوحدات التخزين ومتطلبات التسليم لمعداتهم.

2-انسداد الشريان السباتي الكلاب البوليسية

1. وزن أحد البالغين (> 18 شهرا) الكلاب بيغل والتداوي مسبقاً مع acepromazine العضلي (0.025-.2 مغ/كغ) متبوعاً بحقنه داخل أولية من الكيتامين (5-20 مغ/كغ) والميدازولام (0.01-.25 مغ/كغ). حمل التخدير أعمق مع إيسوفلوراني 1-5% استناداً إلى معدل ضربات القلب، ريسبيريشنز، ولهجة الفك.
   ملاحظة: هو تمليها التخدير الدقيق في الوزن وبروتوكول الحيوانية المعتمدة. على الرغم من أن الحقن قد ينتج الألم للحيوانات، ومدة هذا الانزعاج ستكون قليلة جداً (أقل من 3 s).
2. قبل اتخاذ الحيوان إلى طاولة الجراحة، إزالة الشعر بالقطع. تطبيق التشحيم مرهم العيون لعيون الحيوان أنيسثيتيزيد لمنع جفاف.
3. وضع الحيوان في موقف ضعيف باستخدام نظام تحديد المواقع وإرفاق كهربية (ECG) يؤدي إلى القدم منصات. التنبيب عن طريق القصبة الهوائية مع أنبوب داخل رغامى 6.5 مم مكبلة وميكانيكيا تهوية في 14 نفسا في الدقيقة، والحفاظ على كل الكلب مع استنشاق مستمر من 1-5% إيسوفلوراني (يعتمد على البروتوكول الحيوانية المعتمدة).
4. لتحديد مدى كاناليزاتيون السباتي وطول خثرة الانسداد، إجراء تصوير الأوعية قبل الإصابة، قبل التصوير بالرنين المغناطيسي، وفي وقت التضحية (انظر أدناه للحصول على إرشادات إضافية).
5. إدراج غمد الشرياني فخذي وقسطرة بلاستيكية وآمنة مع خياطة الحرير 0 فضفاضة. مؤقتاً إغلاق غمد والقسطرة أثناء النقل والتصوير الدراسات. انظر الأوعية الكلاب أدناه للحصول على إرشادات إضافية).
6. لتوجه الدم، أدخل قسطرة الوريدية 16 × 45 ملم من خلال الجلد سليمة القاصي إلى غمده الشرياني فخذي قص أسفل الموقع. تقدم القسطرة إلى التعرض الجراحية وتصور أنه كما أنه يدخل في الوريد فخذي مكشوفة متاخم غمد الشرياني. بمجرد إدراج تماما في هذا السياق، سحب الإبرة وكاب القسطرة مع محبس الحنفية 3-طريقة وطرد مع 2 مل من 0.9% عقيمة المالحة. تأمين القسطرة على الجلد بخياطة الحرير 0.
7. 8-10 سم شق الجلد مباشرة على رأس منطقة الشريان السباتي المشترك الحق وتشريح اللفافة لعزل السفينة من الأنسجة المحيطة.
8. إدخال ملقط بين الشريان السباتي والعصب المبهم لفصل بعناية. تجنب لمس الشريان السباتي أكثر من اللازم فإنه قد يسبب انقباض للسفينة.
9. الجاف للمنطقة المعرضة للشريان مع شاش معقم لتفادي فيكل₃ إضعاف الحل.
10. المكان دوبلر تدفق التحقيق حول السباتي مما يتيح مساحة التمهل لالتفاف الشريط الحبل السري حول السباتي دون لمس مسبار التدفق والبدء بتسجيل سرعة الدم وتستمر طوال فترة الإجراءات ( أعلىمنالرقم 1 ). سجل تدفق الأساس ل ~ 5 دقائق قبل تطبيق الشريط الحبل السري.
    ملاحظة: تدفق الأساس قبل وضع الشريط السري₃ فيكل عادة يبلغ في المتوسط حوالي 250 مل/دقيقة.
11. استعداد فيكل₃ السرة الشريط التفاف حول السباتي استخدام هيموستات مباشرة أسفل مسبار التدفق دون لمسها لمدة 15 دقيقة، وإزالة وتجاهل.
    ملاحظة: تعتبر انسداد صفر تدفق مل/دقيقة.
12. استقرار خثرة الانسداد لإضافة 45 دقيقة إضافية المحلول الملحي للتحقيق حسب الحاجة للحفاظ على إشارة.
    ملاحظة: تبعاً للعمر، نوع الجنس والنوع من المواضع الكلاب، إضافية من الشريط السري₃ فيكل استعداد قد يكون ضروريا للسماح بدخول 30 دقيقة للانسداد تحدث قبل إعادة تطبيق. لم توجد فروق لوحظت في تجلط الدم قبل تطبيق كلوريد الحديد مع المساواة بين الجنسين في البيجل. لم يتم العثور على الضرورية مع هذا النموذج إلى إعادة تطبيق شريط الحبل سري₃ فيكل طازجة أكثر من مرة وقد تحيد ابدأ فيكل₃ الشريط السري إعداد البروتوكول. إذا كان يتم استخدام المختبر سلالة مختلفة أو العمر للكلاب البوليسية، فيكل الشريط السري₃ ينبغي أن تطبق على المواد الأولية للتأكد من أن لا يحيد بروتوكول تجلط الدم، أو مجموعة من الأنياب قد تكون ضرورية لإنشاء فيكل₃ وقت التطبيق لأن تولد أو العمر في دراسة معينة. مرات الانسداد، في هذه التجربة، تتراوح بين 8-30 دقيقة بعد التطبيق الشريط السري₃ فيكل.
13. لتحديد حجم السكتة الدماغية أو نزيف بالإضافة إلى الأحداث انصماميه المتلقين للمعلومات التي قد تنجم عن عمليات التدخل الدوائي، نقل الأنياب مع حقن الكيتامين إضافية لجهاز تصوير بالرنين المغناطيسي (انظر أدناه للحصول على معالجة إضافية).
14. في حين لا يزال تحت طائرة الجراحية العميقة للتخدير من نهائي وعائية/التصوير بالرنين المغناطيسي (انظر أدناه لبروتوكول التصوير)، وأشارت إلى عدم وجود استجابة للمؤثرات الضارة، جمع الدم الكامل المطلوب لتحليلها في وقت لاحق، ثم فتح الصدر بالقطع من خلال الأضلاع بدءاً من القص، والمكوس القلب بقطع الأوعية الدموية (اكسسانجوينيشن).
    ملاحظة: في هذه التجربة، كله في الدم (< 10 مل) وجهت في الأساس و 5 دقائق بعد وكيل الإدارة 60 دقيقة بعد التسريب من غمد فخذي ورأيت أي تأثير على عملية ثرومبوليسيس. تضحية، يمكن استخلاص وحدة تخزين غير محدودة لتخزين البلازما إضافية إذا تمت الموافقة عليها في البروتوكول الحيوان. تحليل ومعالجة وتخزين جميع الدم كله خلال 30 دقيقة من التضحية. التأكد من أن الدم لا يوجه تزيد عن النسبة المئوية المعتمدة من وزن الجسم للحيوان كما هو مفصل في البروتوكول الحيوانية المعتمدة. كانت جميع التجارب وصف غير الانتعاش.
15. شطف القلب مع المالحة 0.9% وفلاش تجميد عينات في النتروجين السائل إذا رغبت في ذلك.
16. قبل إزالة كاروتيدس، قياس طول جلطة بوضع مسطرة بجانب ذلك وسجل. ضع علامة النسيج الأوسط الجلطة وفي نفس المكان في السباتي contralateral لسهولة في علم الأنسجة التشذيب. علامة السباتي contralateral في نفس الطول.
    ملاحظة: طول متوسط تجلط مع هذا النموذج 1.75 سم.
17. إزالة على طول الجلطة في كل السفن وإصلاحها في الفورمالين 10%. إزالة الشريان السباتي contralateral داخل طول تميز بعلامة الأنسجة. قطع الشريان السباتي كونترالاتيرال إلى النصف في منتصف عام الجلطة. فلاش تجميد نصف الشريان السباتي contralateral في النتروجين السائل لتحليلها في وقت لاحق وإصلاح النصف الآخر في الفورمالين 10% لتضمين بجوار السباتي المصاب للتحليل النسيجي أدناه.
18. إزالة الأجهزة لأي تحليل المطلوب، شطف مع ملحي 0.9%، وفلاش التجميد في النيتروجين السائل.
19. إزالة الجمجمة مع منشار دائري العظام. ببطء بإزالة الجمجمة دون إلحاق الضرر بالدماغ تحت.
20. بعد إزالة الدماغ من الجمجمة، شطفة في البرد 0.9% المالحة، وقطع قسمين 4 مم من منتصف الدماغ، وقطع أفقياً مع مشرط حاد. ضع أحد القسمين 4 مم إلى 2% عقاري لترسيم الدماغية (انظر إضافية معالجة للدماغ عقاري)، بينما شريحة أخرى توضع في فورمالين 10% لمدة 7 أيام لتلطيخ ح & ه (انظر معالجة إضافية للدماغ ح & ه).

3-الكلاب الأوعية

ملاحظة: هذا هو هو موضح في الشكل 2 ، ويتم أثناء الجراحة في وقت النقاط المثيرة للاهتمام.

1. الشعور بنبض في المنطقة الاربية الحق وجعل شق السهمي البطني 3-5 سم.
2. كشف شريان فخذي وفصله من الأنسجة المحيطة بها استخدام تشريح غير حادة.
3. استخدام هيموستات زاوية لوضع خياطة الحرير 0 حول نهاية القاصي الشريان المكشوفة.
4. التعادل خياطة الحرير 0 القاصي وتطبيق التوتر طفيف على الشريان لقط نهايات فضفاض الحرير 0 خياطة للجلد مع هيموستاتس.
5. ضع خياطة الحرير 0 ثانية حول نهاية الدانية الجزء المكشوفة.
6. ثقب في منتصف الطريق الشريان بين الروابط خياطة الحرير 0 الدانية والبعيدة باستخدام إبرة مقدم 18 جرام لتمرير سلك دليل في الشريان.
7. تحميل غمد 6Fr المجمعة وديلاتور على الأسلاك دليل، استيعاب الأسلاك كما أنه يخرج من الجمعية العامة.
8. النهوض ديلاتور وغمد عبر الأسلاك دليل. تأكد من الحفاظ على الإمساك بالأسلاك كما أنه يبرز من ديلاتور حين تتقدم الجمعية غمد ديلاتور.
9. بعد الإدراج الكامل، التعادل خياطة الحرير 0 الدانية حول غمد للحفاظ على الأرقاء في موقع الثقب الشرياني.
10. في الوقت نفسه إزالة ديلاتور وسلك دليل.
11. فتح صمام أحادي الاتجاه التحقق من وجود تدفق الدم نابض ومطاردة مع 3-5 مل من المحلول الملحي العادي.
12. قم بتوصيل صمام أحادي الاتجاه غمد وصول سائل إرفاق خط التمديد تملأ بضغط على المفاتيح لرصد وتسجيل قياسات ضغط الدم الغازية.
13. قبل تحميل دليل سلك 0.35 "إلى قسطرة أنجيوجرافيك 4Fr. والاتصال المتعددة حقن التباين مع محول y تووهي مجموعة.
14. سحب طرف السلك الدليل فقط داخل الحافة البعيدة للقسطرة ومسح الجمعية بأسرها مع المالحة.
15. إدراج القسطرة angiographic صمام مرقئ من غمده والنهوض ثم سلك دليل حوالي 5 سم بعد نصيحة القسطرة القاصي.
16. تحت التوجيه الفلوري، واستخدام نهج عبر الابهر إلى الوراء، ببطء تقدم القسطرة في القوس الاورطي.
17. حقن 2-3 مل من التباين عامل مخفف 1:1 مع المحلول الملحي العادي لتحديد إقلاع الجذع براتشيوسيفاليك.
18. استخدام سلك دليل لتوجيه القسطرة إلى جذع براتشيوسيفاليك، ومن ثم بشكل انتقائي في الشريان السباتي المشترك الحق.
19. إزالة الأسلاك دليل، وحقن 2-3 مل تباين المخفف للتحقق من أن يتم وضع القسطرة في السباتي.
20. حقن 3-4 مل تباين غير مخفف أثناء تسجيل angiographic يدير استخدام الطرح الرقمي وتقنيات أنجيوجرافيك القياسية.
21. كرر الخطوات من 3.18-3.21 للأوعية المتكررة في نقاط زمنية إضافية.

4-الرنين المغناطيسي-نشر مرجح التصوير (دوي) و T2 مرجح التصوير (T2WI) من الدماغ الكلاب

ملاحظة: هذا هو هو موضح في الشكل 3 ألف-3.

1. التأكد من أن الكلب تحت التخدير العميق.
2. ضمان أن يتم رصد المعلمات الفسيولوجية الكلب طوال التصوير بما في ذلك تخطيط القلب ومعدل ضربات القلب.
3. التأكد من أن الكلب هو الكذب في موقف ضعيف مع رئيسها في فتحات الثنائية من فائف الدماغ.
4. تمكين المغناطيس 3 تسلا (3T).
5. أداء T2 مرجح التصوير (T2WI)، تسلسلات نبض أساسي في التصوير بالرنين المغناطيسي.
   ملاحظة: يستخدم التسلسل الاختلافات في وقت الاسترخاء T2 الأنسجة في مختلف الحالات المرضية.
6. أداء المترجم التصوير للحصول على صور نموذجية من دماغ الكلب قبل التصوير التشريحية استخدام مرجحة T2 تدرج صدى التصوير تسلسل وتحديد مجال الرؤية (FOV)، عدد من الشرائح، وشريحة سمك تغطي كامل الدماغ.
7. استخدم T2-المعلمات التالية: شريحة سمك = 3 مم، TR = ms 4,000، الشركة المصرية للاتصالات = 75 مللي ثانية، يتل = 7، مصفوفة اقتناء = 320 × 256، فا = 180ᵒ، فوف = 320 × 320 بكسل، دقة الصورة = 2.4615 بكسل لكل مم.
8. القيام بنشر مرجح التصوير (دوي) باستخدام تسلسل وزارة التجارة والصناعة استواء صدى ح 4 بعد انسداد MCA ومباشرة قبل التضحية.
9. استخدم المعلمات التالية دوي: ب = 1,500 s/مم²، شريحة سمك = 3 مم، TR = 4,600 مرض التصلب العصبي المتعدد، ET = 86 مرض التصلب العصبي المتعدد، يتل = 55، مصفوفة اقتناء = 140 × 140، اتحاد كرة القدم = 90ᵒ، فوف = 231 × 257، دقة وضوح الصورة = 0.9333 بكسل/مم (الجدول 1).

5-توضع وويوزين (H & E) تلطيخ الدماغ الكلاب

ملاحظة: هذا هو هو موضح في الشكل 3D.

1. وبعد 7 أيام في الفورمالين 10%، تضمين أجزاء الدماغ 4 مم في البارافين.
2. تقليم كتل البارافين حتى هي المستوى مع مبضع، إزالة أي البارافين إضافية من الجزء العلوي من أنسجة المخ، ثم قطع أنسجة المخ في 4 ميكرومتر ووضع قسم الدماغ واحد على كل بوصة شريحة 2 "3".
   ملاحظة: قبل التلوين، وضع جميع الحلول في حاويات منفصلة حيث أنه يمكن نقل الشرائح من حل واحد إلى آخر دون جفاف.
3. بارافينيزي دي كل شريحة الدماغ وهيدرات بماء الصنبور.
4. ضع كل شريحة الدماغ في 560 توضع ل 8 دقيقة.
5. أشطف كل شريحة الدماغ في مياه الحنفية.
6. تفرق كل شريحة الدماغ مع 1% "الكحول حمض" 1 s ثلاث مرات.
7. أشطف كل شريحة الدماغ في مياه الحنفية.
8. الأزرق كل الشرائح المخ مع هيدروكسيد الأمونيوم 1% 1 ثانية.
9. أشطف كل شريحة الدماغ في إدارة مياه الحنفية لمدة 2 دقيقة.
10. يذوي كل شريحة الدماغ في 70% إيثانول (EtOH) ل 1 s اثني عشر مرات.
11. كونتيرستاين كل شريحة الدماغ في ويوزين لمدة 1 دقيقة.
12. يذوي كل شريحة الدماغ في 95% EtOH 1 s اثني عشر مرات.
13. يذوي كل شريحة الدماغ في 100% EtOH.
14. مسح كل شريحة الدماغ في زيلين نفط ثم قم بتطبيق بوصة ساترة 2 "س 3" على رأس الشريحة الدماغ، إزالة فقاعات الهواء مع تصاعد راتنجية وسائل الإعلام.
    ملاحظة: جميع الحلول يتم استخدامها فيما عدا الإيثانول والماء لعدة أيام لتلطيخ وشرائح متعددة. تجهيز جميع بعد أقسام الدماغ وتوضع على الشرائح تتم في تلطيخ الجرار الزجاج، ولكن الحاويات البلاستيكية المصبوغة متوفرة تجارياً أيضا. استبدال أي حل عند ذلك يصبح مشوه والاحتفاظ بها أحكام مشمولة.

6-توضع وويوزين (H & E) تلطيخ من الكلاب كاروتيدس

ملاحظة: هذا هو هو موضح في الشكل 1 (إلى اليسار).

1. بعد 24-72 ساعة في الفورمالين 10%، قطع السباتي المصابين إلى النصف في منتصف عام الجلطة وتضمين ~ 1 سم السباتي الجرحى و ~ 1 سم لعنصر التحكم كونترالاتيرال في نفس الكاسيت البارافين.
   ملاحظة: تجلط الدم داخل السباتي هش. انتظر حتى تم إصلاح السفينة في الفورمالين 10% قبل قطع حيث أن عدم تعكير الجلطة. تضمين كلا المصابين ومراقبة الشرايين السباتي في البارافين نفس سيسمح كتلة القطع في نفس الوقت في نفس المكان في الأوعية الدموية.
2. تقليم كتل البارافين حتى مستوى مع مبضع، إزالة أي البارافين إضافية. ثم قطع المقاطع في 4 ميكرومتر إلى 25 مم × 75 مم × 1 مم الشرائح دون تناوب كتلة البارافين حيث أن فروع السباتي contralateral وتوضع في الجزء العلوي من الشريحة.
   ملاحظة: تم وضع ثلاثة فروع السباتي إلى كل شريحة، ولكن أحد إضافة تبعاً لبقع فائدة.
3. بارافينيزي دي كل شريحة السباتي والهيدرات في مياه الحنفية.
   ملاحظة: خلافا للشريحة الدماغ التي ينبغي معالجتها على حدة، الشرائح السباتي يمكن معالجته في المجمع بوضع في الجرار التي تناسب العديد من الشرائح في وقت واحد دون لمس أحد آخر.
4. وصمة عار على كل شريحة السباتي في توضع لمدة 8 دقائق.
5. أشطف كل شريحة السباتي في مياه الحنفية.
6. تفرق كل شريحة السباتي مع 1% "الكحول حمض" 1 s ثلاث مرات.
7. أشطف كل شريحة السباتي في مياه الحنفية.
8. الأزرق كل شريحة السباتي مع هيدروكسيد الأمونيوم 1% 1 ثانية.
9. أشطف كل شريحة السباتي في إدارة مياه الحنفية لمدة 2 دقيقة.
10. يذوي كل شريحة السباتي في 70% EtOH 1 s اثني عشر مرات.
11. كونتيرستين كل شريحة السباتي في ويوزين أو 1 دقيقة.
12. يذوي كل شريحة السباتي في 95% EtOH 1 s x 12.
13. يذوي كل شريحة السباتي في 100% EtOH.
14. مسح كل شريحة السباتي في زيلين نفط وإضافة ساترة 24 مم × 50 مم مع تصاعد راتنجية وسائل الإعلام لإزالة فقاعات الهواء.

7-2,3,5-ثلاثي فينيل-2 ح-تيترازوليوم كلوريد (عقاري) تلطيخ الدماغ الكلاب

ملاحظة: هذا هو هو موضح في الشكل 3.

1. إعداد مكان إزالة المقطع 4 مم الأخرى من منتصف الدماغ الدانية فورا إلى قسم ح & ه إلى سابقا 2% عقاري (انسداد الشريان السباتي). احتضان في الظلام في 37 درجة مئوية لمالا يقل عن 20 دقيقة، تقليب قسم الدماغ حتى يلطخ كل 5 دقائق.
   ملاحظة: بعد 20 دقيقة، يجب أن يكون المقطع الكرز الأحمر على كلا الجانبين. وقد يلزم وقت إضافي على أساس نضارة عقاري وسمك من قسم الأنسجة.
2. إزالة الحل عقاري واستبدله بارافورمالدهيد 4% في برنامج تلفزيوني، درجة الحموضة 7.4 لتحسين تباين الألوان.
3. عند التناقض بين الأبيض والأحمر تلطيخ الأمثل، وضع شرائح المخ عقاري بين صفائح البلاستيك الشفاف، الجافة للسوائل الزائدة، والمسح الضوئي بدقة عالية لاقتفاء أثر المناطق الدماغية.
   ملاحظة: الأقسام يمكن تخزينها إلى أجل غير مسمى في حل بارافورمالدهيد، لكن تلطيخ سوف تتلاشى.

النتائج

اتباع الإجراءات المفصلة هنا سيؤدي إلى تطوير نموذج التي يمكن استخدامها لتقييم الانسداد الشرياني التدخلات الوقائية أو ثرومبوليتيك. ويبين الشكل 1A سرعة تدفق الأساس وسرعة تدفق الدم الناتجة قبل وأثناء وبعد العلاج سجلتها برمجيات تجارية. يمكن استخدام البيانات...

Discussion

نموذج إصابة الأوعية الدموية المستحث₃ فيكل يستخدم على نطاق واسع لدراسة تجلط الدم في الحيوانات الصغيرة، ومن السهل أن تترجم إلى نموذج الحيوان، ما قبل السريرية كبيرة مع العديد من المزايا. تعديلات طفيفة على التكيف مع البروتوكول إلى الكلاب البوليسية السماح باستخدام كلا التصوير بالرنين ا...

Materials

Name	Company	Catalog Number	Comments
1/8” umbilical tape	Jorgensen Laboratories Inc.,	#J0025UA	for ferric chloride application
4% paraformaldehyde in PBS	Alfa Aesar	AAJ61899AP
10% neutral buffered formalin	Richard-Allan Scientific	5701
2% 2,3,5-triphenyltetrazolium chloride (TTC in PBS, pH 7.4)	Sigma Aldrich	T8877
ADP/Collagen cartridges	Siemens Diagnostics	B417021A
4.5 ml 3.2% sodium citrate blood vacutainer	Becton Dickinson	BD 369714
4.5 ml lithium heparin vacutainer	Becton Dickinson	BD 368056
EDTA K3 vacutainers	Becton Dickinson	BD455036
Doppler flow probe	Transonic Systems Inc	MA2.5PSL
Hematoxylin 560	Surgipath	3801570
Eosin	Surgipath	3801602
LabChart Software	ADInstruments Inc.
Prisma Fit 3 tesla (3T) magnet	Siemen's Diagnostics
Sodium heparin for injection (to coat blood gas syringe)	NovaPlus	402525D
HUG-U-VAC positioning system	DRE Veterinary	1320