لتوليد cybrid ناقل ، استخدم الخلايا المتلقية للميتوكوندريا التي تم استنفادها إلى الميتوكوندريا عن طريق علاج Rhodamine 6G ، وقم بإجراء الاندماج مع الميتوكوندريا المعزولة من الخلايا المانحة للميتوكوندريا. ضمان إلغاء وظيفة الميتوكوندريا المناسبة في الخلايا المتلقية وتنقية العضيات من الخلايا المانحة عن طريق زرع عدد صغير من الخلايا المعالجة بالرودامين 6G والميتوكوندريا المعزولة في وسط استزراع كامل في صفيحة من ستة آبار. تحقق من عدم وجود خلايا باقية في الآبار بعد شهر واحد من الثقافة.
للمضي قدما في الانصهار ، أضف بعناية الخلايا المعالجة ب Rhodamine 6G إلى حبيبات الميتوكوندريا المعزولة. ثم أجهزة الطرد المركزي عند 520 جم لمدة خمس دقائق للسماح للخلايا بالاختلاط مع الميتوكوندريا. أضف 100 ميكرولتر من البولي إيثيلين جلايكول 50٪ وأعد تعليق الحبيبات برفق لمدة 30 ثانية ثم اترك التعليق يستريح دون أن يمسه لمدة 30 ثانية أخرى.
أخيرا ، انقل المزيج إلى طبق من ستة آبار مع وسط زراعة خلايا كامل جديد ، وضعه في الحاضنة عند 37 درجة مئوية مع 5٪ ثاني أكسيد الكربون. عادة ، بعد حوالي أسبوع واحد ، يجب أن تبدأ cybrids transmitochondrial في النمو ، مما يؤدي إلى استنساخ يمكن اختياره بشكل فردي أو خلطه في مجموعة قبل تحليلها. اختلفت شظايا التقييد التي تم الحصول عليها من تعدد أشكال طول جزء التقييد ، أو RFLP ، لتحليل الميتوكوندريا من النوع البري عن تلك المتحولة.
أشار تحليل RFLP لخطوط الخلايا المرسلة الجديدة إلى أن شظايا التقييد كانت متطابقة مع تلك التي تم الحصول عليها في المتبرعين بالميتوكوندريا الخاصة بهم ومختلفة عن تلك الناتجة عن خطوط الخلايا المتلقية. علاوة على ذلك ، يمكن أيضا استخدام الاختلاف في التنميط الجيني النووي النموذجي للحمض النووي لخطي الخلية المستخدمين في عملية التهجين لتأكيد نقاء الحمض النووي النووي.
