لإجراء النشاف الجنوبي ، ابدأ بقطع غشاء نايلون إلى قطعة بحجم 10 × 12 سم. اصنع درجة في نفس موضع الجل. قم بتنشيط الغشاء عن طريق غمسه في الماء المقطر ، متبوعا بمحلول سترات محلول ملحي 20X من الصوديوم.
ضع فتيل ورق الترشيح على صينية مزدوجة مقلوبة ، واضبطها بحيث تلامس الأطراف قاعدة الدرج الخارجي. ضع الجل فوق ورق الترشيح. ثم ضع غشاء النايلون المنشط فوق الجل ، مع التأكد من تداخل الشقوق.
قم بإزالة أي فقاعات هواء بقضيب زجاجي. ضع كومة طولها سنتيمتران بحجم 9.5 × 11.5 سم من ورق ترشيح السليلوز ، وكومة أخرى من ورق الترشيح العادي بستة سنتيمترات. ضع وزنا فوق الإعداد لتوزيع الوزن بالتساوي.
املأ الدرج الخارجي بمحلول سترات محلول ملحي 20 ضعفا من الصوديوم ، واتركه طوال الليل لنقل فعال. بعد النقل الجنوبي ، قم بتثبيت الحمض النووي المنقول على الغشاء عن طريق التشابك فوق البنفسجي على جهاز نقل الأشعة فوق البنفسجية. اغسل الغشاء مرتين باستخدام 25 مل من محلول سيترات الصوديوم الملحي 2X.
لأداء التهجين ، احتضان الغشاء في 10 ملليلتر من المخزن المؤقت قبل التسخين قبل التهجين. حرك الغشاء برفق يدويا على فترات متكررة. ثم احتضان اللطخة في 10 ملليلتر من المخزن المؤقت للتهجين عند 42 درجة مئوية لمدة ثلاث ساعات مع تحريض لطيف.
اغسل اللطخة مرتين في 25 مل من المخزن المؤقت الصارم لمدة 10 دقائق في درجة حرارة الغرفة مع تحريض لطيف. الآن اغسل اللطخة مرتين في 25 مل من المخزن المؤقت الصارم الذي تم تسخينه مسبقا عند 50 درجة مئوية لمدة 15 دقيقة مع تحريض لطيف. شطف مع 15 ملليلتر من العازلة للغسيل لمدة خمس دقائق مع تحريض لطيف في درجة حرارة الغرفة.
احتضان الغشاء في 10 ملليلتر من محلول الحجب الطازج لمدة 30 دقيقة في درجة حرارة الغرفة مع تحريض لطيف. ثم ضعه في 10 ملليلتر من مضاد الديجوكسيجينين المترافق مع محلول عمل الفوسفاتيز القلوي. اغسل اللطخة مرتين في المخزن المؤقت للغسيل في درجة حرارة الغرفة لمدة 15 دقيقة.
الآن احتضان في 10 ملليلتر من العازلة للكشف لمدة خمس دقائق في درجة حرارة الغرفة. بعد إزالة المخزن المؤقت الزائد ، ضع الغشاء على ورقة خلات مع توجيه جانب الحمض النووي لأعلى. أضف ما يقرب من واحد إلى 1.5 ملليلتر من محلول الركيزة قطرة قطرة على الغشاء.
ضع على الفور ورقة خلات أخرى عليها واحتضانها لمدة خمس دقائق في درجة حرارة الغرفة. اضغط على محلول الركيزة الزائد قبل التصوير. باستخدام نظام تصوير وثائق الجل ، اجمع عدة صور غير مشبعة في نقاط زمنية مختلفة للتحليل.
بعد النشاف الجنوبي والتهجين ، كانت شظايا تقييد التيلومير مرئية بوضوح ، يشار إليها باللطاخة.
