Microfluidic Shear Apparatus Setup for Single-Cell Fluid Shear Assay

ابدأ البروتوكول بإعداد وسائط التدفق اللزج لمقايسة القص. للقيام بذلك ، سخن وسائط الاستزراع الأساسية لمدة 10 إلى 20 دقيقة عند 60 إلى 70 درجة مئوية باستخدام تحريك مغناطيسي أو لوح تسخين. أثناء تحريك الوسائط باستمرار ، أضف ميثيل سلولوز برفق إليها لمساعدة جزيئات ميثيل سلولوز على التشتت بسرعة دون تخثر.

اسمح لهذه العملية بالاستمرار لمدة 15 إلى 24 ساعة تقريبا لضمان مزيج متجانس واضح من الوسائط والسليلوز. لإعداد جهاز القص ، قم بتوصيل حشية مطاطية بمسار التدفق لربط الاتصال بين غرفة التدفق وطبق بتري ، وضمان تدفق موحد متحكم فيه للخلايا المفردة. تأتي الحشية المطاطية بأحجام مختلفة اعتمادا على ملف التدفق المطلوب ومنطقة المراقبة.

بعد ذلك ، قم بإعداد نظام فحص القص الذي يتألف من 60 أو 100 ملليلتر من المحاقن المزدوجة المتصلة بمضخة حقنة قابلة للبرمجة للتسريب وسحب وسائط الثقافة اللزجة. املأ المحقنة بوسائط التدفق اللزجة المعدة وقم بتوصيل المحقنة المملوءة بموقعها الخاص على مضخة المحقنة. ثم قم بتوصيل حقنة فارغة بموقع المحقنة الأخرى على مضخة المحقنة.

باستخدام موصلات الأنابيب والأنابيب مقاس 1/16 بوصة ، قم بتوصيل كلا المحاقن بغرفة التدفق. قم ببرمجة المضخة لضخ وسحب كمية معينة من السوائل بمعدل معين ، وحدد المحاقن المقابلة. يتم عرض مثال على البرنامج على الشاشة.

استنشاق وسائط زراعة الخلايا من طبق بتري للتحضير للقص. بعد ذلك ، أدخل وثبت غرفة التدفق مع الحشية المطاطية على طبق بتري الذي يحتوي على الخلايا المرفقة. ضع غرفة تدفق الموائع الدقيقة المجهزة مع الخلايا الموجودة في الطبق على مجهر مقلوب متصل بشاشة عرض.

الإعداد جاهز الآن لتطبيق إجهاد قص السوائل على خلية واحدة ومراقبة التشوه الخلوي الناتج بصريا.