Performing Single-Cell Shear Assay and Imaging

لإجراء بروتوكول فحص القص أحادي الخلية ، استخدم إعداد جهاز القص المجمع مسبقا والذي يتكون من غرفة تدفق الموائع الدقيقة المجهزة الموضوعة على طبق بتري الذي يحتوي على الخلايا محل الاهتمام. ضع الإعداد بالكامل على مجهر مقلوب مع هدف عالي بما فيه الكفاية وشاشة عرض. ركز هدف المجهر ، مما يضمن التباين الكافي وحواف الخلايا المميزة.

حرك مرحلة المجهر للتأكد من أن الخلايا مرئية بوضوح على شاشة العرض وأنها صور حية. حدد خلية واحدة أو عدة خلايا مميزة داخل مسار التصوير أو التدفق لغرفة التدفق المجهزة وطبق بتري. للحفاظ على تدفق وسائط لزج موحد مستمر ، حدد معدلات ضخ وسحب مماثلة.

تأكد من التدفق الصفحي المناسب للسائل الذي يحتوي على رقم رينولد أو RE أقل من 100. انقر فوق تشغيل على مضخة القص لحقن سائل القص وسحبه بمعدل مستمر. تأكد من عدم وجود فقاعات أثناء ضخ السوائل.

ابدأ في تسجيل مقطع فيديو بالنقر فوق تسجيل على البرنامج قبل أن يتلامس سائل القص المملوء مع الخلية محل الاهتمام تحت المجهر. استمر في التسجيل لمدة سبع دقائق أو للمدة المطلوبة من التعرض للإجهاد أو حتى تنفصل الخلية محل الاهتمام عن قاع الطبق. انقر فوق إيقاف التسجيل على برنامج المجهر عند اكتمال التشغيل حسب الرغبة.

يقوم البرنامج تلقائيا بحفظ الصور ومقاطع الفيديو التي يمكن جمعها باستخدام محركات أقراص فلاش لمزيد من التحليل. قم باستخراج الصور كملفات TIFF ، ويفضل أن يكون ذلك في إطار واحد في الثانية للتحليل السهل.