اقطع شريطا كربونيا موصلا وألصقه بين رقائق السيليكون المثبتة بأقسام خلايا البنكرياس ومرحلة عينة SEM. بعد ذلك ، اضبط الجهد المتسارع FESEM على كيلوفولت بمسافة عمل تبلغ أربعة ملليمترات. في شريط القائمة العلوي ، انقر فوق رمز HL.
ثم ، عند التكبير المنخفض ، قم بتوجيه القسم الأول من شرائط الشريحة المستهدفة ، ومرة أخرى ، انقر فوق رمز HL للتبديل إلى وضع التكبير العالي. اجمع صورة مناسبة لهيكل الاهتمام عن طريق ضبط سطوع الصورة وتباينها وتكبيرها. بعد ذلك ، حدد عرض المشروع ، ثم افتح البيانات ، واستورد ملفات الصور لتحليلها إلى البرنامج.
قم بمحاذاة الصور بالنقر فوق محاذاة الشرائح وتحريرها. ثم ، في شريط القائمة الأيسر السفلي ، اضبط قيمة نطاق الكثافة عن طريق تعديل شفافية الصورة. حدد الوحدة النمطية Extract Sub-Volume، وانقر فوق مجموعات البيانات المحاذاة لتلائم حجم الجزء المتداخل من المكدس بأكمله.
بعد ذلك ، ضمن القسم الفرعي للتجزئة ، حدد إعادة التشكيل ، ثم التجزئة ، وانقر فوق حفظ. ثم، اختر عتبة العصا السحرية، وحجم أداة الفرشاة، لتحديد النطاق الصحيح. من قائمة التحديد ، انقر فوق إضافة رمز لإضافة المنطقة المحددة.
بعد الانتهاء من التجزئة الإقليمية ، قم بإنشاء ملف صورة يتبع أفضل النتائج لحجم الكائن ودقة الصورة. انقر فوق محرر المحاصيل ، وفي مربع التمرير الافتراضي ، أدخل الرقم ستة. بعد ذلك ، من القائمة المنسدلة اليسرى ، انقر بزر الماوس الأيمن على المنطقة الرمادية ضمن القسم الفرعي للمشروع وحدد إنشاء Surface ، ثم إنشاء وتطبيق.
في الملف الذي تم إنشاؤه ، باستخدام وحدة Surface View ، قم بإنشاء بنية السطح وتمثيل 3D. تكشف صور 2D FESEM أنه في المجموعة الضابطة ، تم توزيع الميتوكوندريا بالتساوي مع هياكل cristae العادية. في المقابل ، أظهرت مجموعة RSL3 تقلص الميتوكوندريا مع زيادة كثافة الغشاء وهياكل cristae غامضة.
ومع ذلك ، لم تتدهور جميع كريستات الميتوكوندريا في مجموعة RSL3 حيث ظل بعضها سليما. بالمقارنة مع مجموعة RSL3 ، كان لدى المجموعة المثبطة في الغالب هياكل cristae سليمة مع عدد قليل فقط غير واضح. قدمت صور 3D للمجموعة الضابطة رؤية أكثر دقة للميتوكوندريا وهياكلها الكريستية.
أظهرت الصور ثلاثية الأبعاد لمجموعة RSL3 الميتوكوندريا غير المنتظمة والمفرغة من الهواء ، بينما أظهرت المجموعة المثبطة أشكالا متنوعة من cristae. أظهر القياس الكمي للتغيرات في الميتوكوندريا أن مجموعة RSL3 قد قللت بشكل كبير من طول وحجم الميتوكوندريا ، مقارنة بالمجموعة الضابطة ، بينما أظهرت المجموعة المثبطة نتائج وسيطة. تسبب RSL3 أيضا في خلل وظيفي في الميتوكوندريا وتغيير التمثيل الغذائي الخلوي عن طريق تغيير مورفولوجيا الميتوكوندريا وتحفيز داء الحديديات.
