افتح برنامج LightBox للحصول على الصور. لتحديد مجموعات الليزر والمرشحات ، استخدم معلمات صبغة برتقالية عن طريق تحديد الصبغة المستخدمة في التلوين من قائمة الأصباغ. باستخدام نظرة عامة ، انقر فوق مباشر لتركيز الخلايا.
بمجرد أن يتم التركيز على الخلايا ، اضبط إعدادات اكتساب متحد البؤر. بعد ذلك ، حدد زر عائد الاستثمار المستطيل وأنشئ منطقة اهتمام حول الميتوكوندريا ذات الأهمية عن طريق النقر والسحب لتشكيل المنطقة. لضبط بوابة الكاشف لاستنفاد الانبعاثات المحفزة أو اكتساب الثبات ، بجوار القائمة العامة ، حدد قائمة البوابات أو انقر مع الاستمرار لإضافة القائمة إلى العرض.
للحصول على stead ، اضبط ليزر الإثارة على 15 إلى 20٪ وليزر استنفاد stead على 20 إلى 25٪ مع تراكم 10 خطوط. استخدم وقت بقاء بكسل يبلغ أربعة ميكروثانية وحجم بكسل من 20 إلى 25 نانومتر. قم بإجراء الفاصل الزمني عن طريق تحديد القائمة المنسدلة للوقت ، ثم تعيين عدد التكرارات إلى خمسة وفاصل زمني يبلغ 25 أو 30 ثانية.
يمكن أخذ مكدس Z باستخدام خيار مستوى الصوت وضبط نطاق حجم Z المطلوب وحجم الخطوة. افتح برنامج فك التفاف الصورة الثابتة لفك تائه الصور الأولية باستخدام خوارزمية البرنامج. بعد التأكد من صحة المعلمات المجهرية ، حدد الزر السريع واضبط نوع الالتفاف بسرعة كبيرة أو قياسية أو عدوانية أو محافظة بدرجات متفاوتة من قوة الالتفاف.
تنفيذ الالتفاف. احفظ الصور بتنسيق ICS2. في الصورة J ، انقر فوق ملف ثم افتح لفتح ملفات ICS2 من برنامج deconvolution.
حدد المكونات الإضافية ، ثم التجزئة متبوعة بتجزئة Weka القابلة للتدريب لفتح الصور الثابتة غير المعقدة في المكون الإضافي لتجزئة Weka القابل للتدريب. في إعدادات التجزئة ، حدد التمويه الغاوسي وإسقاطات الغشاء وميزات مرشح sobel. قم بتسمية فئة واحدة على أنها cristae والأخرى كخلفية.
بعد ذلك ، ارسم خطا فوق الهيكل لتعيينه لأي من الفئتين. ثم حدد زر الإضافة على الجانب الأيمن إما cristae أو الخلفية. ثم حدد زر مصنف القطار على الجانب الأيسر لإنشاء خريطة بناء على المعلومات المقدمة إلى المكون الإضافي.
انقر فوق زر حفظ المصنف لحفظ إعدادات المصنف للتجزئة المستقبلية. استخدم خريطة احتمال cristae لعتبة الصورة في الصورة J لإنشاء قناع ثنائي ، ثم انتقل إلى التحليل ، ثم تحليل الجسيمات. أخيرا ، ارسم خطا متعدد النقاط ، واضبط سمك الخط على عرض عدة بكسل وقم بتحريك الخط ليناسب الميتوكوندريا.
في هذه الدراسة ، قام تصوير الميتوكوندريا في خلايا SH-SY5Y غير المتمايزة بحمض الريتينويك المتمايزة مع التصوير بفاصل زمني كما هو موضح. يمكن استخدام صور stead غير الملتوية لتحديد دورية cristae في منطقة معينة وقياسات حجم cristae وشكلها.
