Autofluorescence Blocking and Antigen Retrieval in Tissue Samples

للبدء ، قم بإعداد سترات مركزة 10 مرات أو محلول استرجاع مستهدف أو TRS من الأس الهيدروجيني ستة ، وفقا لتعليمات الشركة المصنعة. تمييعه إلى نسبة 1:10 بالماء منزوع الأيونات. ثم سخني المحلول في وعاء تلطيخ بلاستيكي إلى 96 درجة مئوية.

قم بإزالة الشرائح من رف الشرائح وضعها في غرفة مبللة. بعد ذلك ، ماصة قطرة أو قطرتين من عامل تقليل التألق الذاتي على كل عينة من الأنسجة واحتضان العينات لمدة خمس دقائق. قم بتكديس الشرائح مرة أخرى في رف الشرائح ، واشطفها لمدة دقيقة واحدة بنسبة 60٪ من الإيثانول باستخدام حركات لأعلى ولأسفل لإزالة كاشف تقليل التألق الذاتي غير المستخدم.

اغمر الرف المنزلق في ماء منزوع الأيونات لمدة خمس دقائق. انقل الشرائح إلى برطمان تلطيخ باستخدام مخزن TRS المؤقت المسخن مسبقا لاسترجاع المستضد. احتضان الشرائح لمدة 10 دقائق عند 96 درجة مئوية في حمام مائي.

قم بإزالة برطمان التلوين واتركه يبرد إلى درجة حرارة الغرفة لمدة 60 إلى 90 دقيقة تقريبا. بعد ذلك ، قم بإزالة TRS مع الاحتفاظ بالشرائح في الجرة. اشطف الشرائح مرتين باستخدام محلول ملحي مخزن TRIS يحتوي على 0.05٪ توين عند درجة حموضة 7.4 لمدة ثلاث دقائق لكل منهما لإزالة أي بقايا TRS متبقية.

ضع الشرائح في غرفة مبللة. امسح الماء الزائد برفق من الشرائح باستخدام المناديل الورقية ، ثم ضع دائرة حول كل عينة باستخدام قلم حاجز كاره للماء لمنع محلول الأجسام المضادة من الجريان.