ابدأ بتلميع النار ثلاث ماصات للمراعي باستخدام موقد بنسن ، مما يؤدي إلى تناقص الأقطار. بعد ذلك ، قم بتعقيم بطن سد الفأر الحامل بالقتل الرحيم بنسبة 70٪ من الإيثانول. قطع فتح تجويف البطن من تخليق العانة إلى عملية الخنجري من القفص الصدري.
الآن ، استخرج قرن الرحم من تجويف البطن وضعه في صفيحة 100 ملم مملوءة بمحلول HBSS المثلج. استخراج وفصل جميع الأجنة من الرحم المغسول باستخدام ملقط ناعم. قطع رأس أجنة الفئران المستخرجة بسرعة ووضع الرؤوس في طبق بتري 60 ملم مليء ب HBSS.
ضع زوجا من الملقط الناعم في تجويف العين لتثبيت الدماغ. مع زوج آخر ، قشر الجلد والجمجمة حتى يصبح الدماغ مرئيا. أخرج الدماغ من المصابيح الشمية من الجمجمة واقلبها رأسا على عقب.
مراقبة القشرة على الجانب البطني وما تحت المهاد على الجانب الظهري. استخدم ملقط منحني لإزالة طبقة السحايا والأوعية الدموية حتى يظهر الدماغ أبيض وواضح ، وافصل منطقة المهاد عن بقية الدماغ. قطع منطقة ما تحت المهاد إلى ثلاث إلى أربع قطع دقيقة صغيرة ، واستخدم ماصة لنقل القطع إلى أنبوب سعة 15 ملليلتر.
بعد ذلك ، املأ الأنبوب بستة ملليلتر من HBSS. ثم أضف مزيج الإنزيم 1 بمجرد استقرار الأنسجة وإزالة المادة الطافية. احتضان الأنبوب في حمام مائي 37 درجة مئوية لمدة 15 دقيقة ، مع التقليب كل خمس دقائق لإعادة تعليق الأنسجة.
الآن ، أضف 30 ميكرولترا من Enzyme Mix 2 وافصل الأنسجة عن طريق السحب لأعلى ولأسفل 10 مرات باستخدام ماصة مرعى ذات قطر كبير. بعد حضانة إضافية لمدة 10 دقائق ، أضف 15 ميكرولترا المتبقية من Enzyme Mix 2. باستخدام ماصة مصقولة بالنار ذات قطر متناقص ، ماصة الأنسجة 10 مرات.
أضف على الفور 10 ملليلتر من HBSS مع 0.5٪ BSA إلى الأنبوب. ثم الطرد المركزي الأنبوب في 300 غرام لمدة 10 دقائق في درجة حرارة الغرفة. نضح المادة الطافية وأعد تعليق حبيبات الخلية في ملليلتر واحد من HBSS مع 0.5٪ BSA.
