بالنسبة للعدوى الفيروسية العدسية ، قم بطلاء الخلايا المستهدفة MPNST التربسينية بعد عدها ، مع الحفاظ على 2.5 مليون خلية لكل طبق 15 سم. تحويل الخلايا مع الفيروس المذاب في 0.5 تعدد العدوى ، في وجود خمسة ميكروغرام لكل ملليلتر من البوليمر الموجبة . التربسين الخلايا بعد ثلاثة أيام من إضافة بوروميسين.
أجهزة الطرد المركزي نصف عدد الخلايا في 200 G لمدة خمس دقائق في جهاز طرد مركزي منضدية. بعد إعادة طلاء النصف الآخر من عدد الخلايا ، قم بزراعتها لما يقرب من سبعة مضاعفة قبل الحصاد والطرد المركزي كما هو موضح سابقا. قسم حبيبات الخلية المعاد تعليقها المقابلة للوقت المطلوب إلى أنبوبين بولي ميثيل بنتين سعة 15 ملليلتر.
أضف 500 ميكرولتر من 10٪ SDS لكل أنبوب. تخلط وتحتضن في درجة حرارة الغرفة لمدة خمس دقائق. ضع الأنابيب في جهاز قص الحمض النووي لصوتنة الحمض النووي.
بعد إضافة الفينول والكلوروفورم. تخلط جيدا عن طريق الدوامة بقوة بأقصى سرعة ممكنة لمدة 45 إلى 60 ثانية. انقل ثلاثة ملليلتر من المرحلة العليا الصافية الناتجة من كل أنبوب إلى أنبوب آخر جديد سعة 15 ملليلتر.
أضف 0.5 ملليلتر من ثلاثة أسيتات الصوديوم المولية وأربعة ملليلتر من الأيزوبروبانول واخلطها جيدا. بعد طرد الأنابيب لمدة 30 دقيقة عند 7 و 200 جم و 20 درجة مئوية والتخلص من المادة الطافية ، أضف 0.5 ملليلتر من الإيثانول بنسبة 70٪ إلى الحبيبات وقم بإزاحتها عن طريق السحب لأعلى ولأسفل. اجمع الكريات المعاد تعليقها من كلا الأنبوبين في أنبوب طرد مركزي سعة 1.5 ملليلتر.
قم بإجراء تفاعلات تفاعل البوليميراز المتسلسل باستخدام الظروف الموضحة على الشاشة. بعد تفاعل تفاعل البوليميراز المتسلسل الثاني ، ادمج العينات الأربع في أنبوب طرد مركزي صغير واحد. وأضف 80 ميكرولترا من صبغة التحميل 6X إليها.
تصور الجل وقم بتأكيد الشريط عند حوالي 250 زوجا أساسيا. كشفت خلايا MPNST البشرية التي تم تحويلها باستخدام عنصر تحكم غير مستهدف وفيروس lentivirus ، معبرة عن أربعة أنواع مختلفة من الحمض النووي الريبي قصير دبوس الشعر Bcl-6 ، أن العديد من الحمض النووي الريبي قصير دبوس الشعر Bcl-6 قلل بشكل ملحوظ من أعداد الخلايا. أظهرت اللطخة المناعية أن درجة الانخفاض في أعداد الخلايا مرتبطة بدرجة ضربة قاضية Bcl-6.
