عزل العدلات وتنشيطها

تحضير تخفيف 12 ملليلتر من وسائط الفصل 60٪ و 70٪ في أنابيب مخروطية 50 ملليلتر. بعد ذلك ، قم بإعداد التدرج من الأسفل إلى الأعلى بإضافة أربعة ملليلتر في وقت التخفيف بنسبة 60٪ على التخفيف بنسبة 70٪ باستخدام ماصة خمسة ملليلترات. ثم ضع بعناية 12 ملليلترا من الدم الهيبارين فوق تدرج الكثافة وأجهزة الطرد المركزي عند 200 جرام لمدة 15 دقيقة في درجة حرارة الغرفة.

تخلص من طبقات الخلايا البلازمية وأحادية النواة. ثم انقل بعناية حوالي 7.5 ملليلتر من الطبقة فوق حبيبات كرات الدم الحمراء إلى أنبوبين مخروطيين سعة 15 ملليلتر. أجهزة الطرد المركزي الأنابيب في 300G لمدة خمس دقائق عند 19 درجة مئوية.

تابع غسل حبيبات الخلية بمحلول الملح المتوازن Hanks's أو HBSS. ثم إجراء تحلل منخفض التوتر وإزالة خلايا الدم الحمراء المتبقية. بعد التخلص من المادة الطافية ، أعد تعليق العدلات متعددة الأشكال برفق في المخزن المؤقت المتبقي وانقلها إلى أنبوب طرد مركزي صغير بارد الجليد.

بعد ذلك ، قم بنقل ثلاثة حصص ميكرولتر واحد من تعليق الخلية إلى شريحة زجاجية نظيفة. وصمة عار مع بانوبتيك سريع لتقييم مورفولوجيا الخلية ونقاوتها. راقب الخلايا تحت المجهر وعد 300 خلية عشوائية في كل بئر.

ضع علامة على العدلات وأنواع الخلايا الأخرى لتقييم نقاء الفصل. بعد ذلك ، انقل ميكرولترا واحدا من تعليق الخلية إلى 49 ميكرولترا من صبغة تريبان الزرقاء بنسبة 0.2٪ وعد الخلايا الميتة والقابلة للحياة باستخدام غرفة نيوباور. اضبط تركيز الخلية على 6،667 خلية لكل ميكرولتر مع 50٪ بلازما ذاتية و 50٪ HBSS مكملة بالكالسيوم والمغنيسيوم.

ثم قسم تعليق الخلية بالتساوي بين أنابيب الطرد المركزي الصغيرة سعة 1.5 ملليلتر المقابلة لظروف الاختبار ، بما في ذلك التحكم السلبي. قم بإعداد نظام تنشيط لكل حالة ، مما يضمن بقاء تركيز الخلية النهائي عند 6،600 عدلة متعددة الأشكال لكل ميكرولتر. احتضان عند 37 درجة مئوية دون دوران.