IPSC Differentiation into Posterior Primitive Streak and Nephrogenic Intermediate Mesoderm

Please note that all translations are AI generated. Click here for the English version.

180 Views

•

02:23 min

•

September 1st, 2023

DOI :

10.3791/200499-v

September 1st, 2023

•

Langping Gao*¹^,², Yue Wang*³, Gang Wang⁴, Hangdi Wu², Qingtao Yan¹, Jingjing Wang¹, Fei Liu¹, Haidong Fu¹, Wei Li⁵, Lidan Hu¹, Jianhua Mao¹^,²

¹Department of Nephrology, The Children's Hospital, Zhejiang University School of Medicine, ²Zhejiang University School of Medicine, ³Hubei Normal University, ⁴National Clinical Research Center of Kidney Diseases, Jinling Hospital, Nanjing University School of Medicine, ⁵Clinical Laboratory, The Children’s Hospital, Zhejiang University School of Medicine, National Clinical Research Center for Child Health

* These authors contributed equally

Transcript

ابدأ بغسل الخلايا الجذعية المستحثة متعددة القدرات أو iPSCs على مصفوفة الغشاء المغلفة بلوحة 6 آبار مع 2 ملليلتر DPBS. نضح DPBS باستخدام ماصة. بعد ذلك ، أضف ملليلترا واحدا من حل فصل الخلايا المتاح تجاريا لفصل iPSCs.

ثم ضع الخلية في حاضنة عند 37 درجة لمدة خمس دقائق. الآن ماصة ملليلتر واحد من mTeSR على iPSCs ، مما يضمن انفصال الخلايا عن السطح البلاستيكي. أجهزة الطرد المركزي هذه الخلايا في 400g لمدة ثلاث دقائق في درجة حرارة الغرفة.

أعد تعليق حبيبات الخلية ، ثم عد أرقام الخلايا باستخدام مقياس الدم. بعد ذلك ، قم بزرع مجموعة من كثافات الخلايا على صفيحة من 6 آبار مطلية بمصفوفة غشائية. استزراع هذه مع mTeSR تستكمل مع 10 ميكرومولار رو كيناز المثبطات.

استزرع الألواح طوال الليل في حاضنة ثاني أكسيد الكربون عند 37 درجة مئوية. في اليوم التالي استنشاق mTeSR وغسل الخلايا مع اثنين ملليلتر من DPBS. بعد ذلك ، أضف ملليلتر من المرحلة 1 المتوسطة إلى الخلايا.

ثم ضع الخلايا في حاضنة 37 درجة مئوية لمدة أربعة أيام. في اليوم الرابع ، قم بإزالة وسط المرحلة 1 وغسل الخلايا بمليلتر من DPBS. ثم أضف ملليلتر من المرحلة 2 المتوسطة إلى الخلايا قبل احتضان الخلايا كما كان من قبل.

من اليوم صفر إلى اليوم الرابع ، توسعت iPSCs بسرعة واتخذت أشكالا معينية أو مثلثة. وصل التقاء 90 إلى 100٪ وتراكم بالتساوي حتى اليوم السابع. عند زراعة التعليق ، تشكل الركام تلقائيا هياكل النيفرون بعد الانفصال في اليوم السابع.

Explore More Videos

IPSC Differentiation

Posterior Primitive Streak

Nephrogenic Intermediate Mesoderm