للبدء ، قم بإصلاح أطراف الماوس المخدر بشريط لاصق. امسك جلد البطن لأعلى واقطعه بعناية على طول محيط الصدر لكشفه بالكامل. قم بعمل قطع صغير في الأذين الأيمن باستخدام مقص العيون وأدخل على الفور إبرة قياس التروية 22 في قمة البطين الأيسر.
ثم ادفع 30 إلى 50 ملليلتر من سائل التروية القلبية عبر المحقنة. بعد أن يصبح سائل التدفق الخارجي من الأذين الأيمن واضحا تماما ، قم ببث حجم متساو من محلول PFA بنسبة 4٪. تشريح الأنسجة والأعضاء وتثبيتها بين عشية وضحاها مع 4 ٪ PFA عند أربع درجات مئوية.
للحث على إزالة الكلس من الأنسجة. ضع أنسجة القلب الثابتة في 10 ملليلترات من محلول EDTA على طاولة اهتزاز عند 37 درجة مئوية. احتضان لمدة يومين تقريبا وتغيير السائل يوميا.
ضع عظام كالفاريا الثابتة في 20 ملليلتر من محلول كوادرول 25٪ لإزالة لون الأنسجة. احتضان على طاولة تهتز عند 37 درجة مئوية ليوم واحد وتغيير السائل مرة واحدة. بعد ذلك ، ضع الأنسجة بالتتابع في محلول 30٪ من البيوتانول الثالث أو السل.
ثم محلول 50٪ تيرابايت ، ثم محلول 70٪ تيرابايت لإجراء إزالة الشحوم المتدرجة. بعد ذلك قم بتجفيف العينات ومحلول TB PEG لمدة ست ساعات على طاولة اهتزاز عند 37 درجة مئوية. أخيرا ، ضع الأنسجة المجففة تماما في محلول BB PEG على طاولة اهتزاز عند 37 درجة مئوية.
بعد ساعتين إلى أربع ساعات من الحضانة ، ستصبح الأنسجة شفافة. أدت طريقة PEGASOS لإزالة الأنسجة إلى أنسجة شفافة. أظهرت الأنسجة التي تم تطهيرها مع تلطيخ EDU الكامل أن الملصقات كانت فعالة ومحفوظة جيدا.
في المجموعة الضابطة ، تم توزيع العديد من الخلايا الإيجابية EDU بشكل منتشر في جميع أنحاء الغرز. بعد يوم واحد من توسع الخيط ، لوحظت خلايا متكاثرة في منتصف وحواف الخيط. مع اتساع الخيط ، انخفض عدد الخلايا المتكاثرة بمرور الوقت.
كانت الخلايا ذات العلامات الخضراء عبارة عن خلايا صغيرة مستديرة في نخاع العظم ، والتي تختلف عن خلايا خياطة EDU الإيجابية.
