ابدأ باحتضان ألياف العضلات الهيكلية للفئران باستخدام TMRE في درجة حرارة الغرفة لمدة 20 دقيقة. بعد ذلك ، قم بتشغيل البرنامج القياسي للمجهر متحد البؤر ، واختر إطار التكوين. ضمن مربع الحوار تكوين الأجهزة ، حدد ليزر ، وحدد خيار Helium Neon 543.
قم بالوصول إلى مربع حوار الاستحواذ عبر إطار عمل الاستحواذ، وحدد لوحة XYZ. ثم حدد تنسيق 512 × 512 بسرعة 400 هرتز. تحت لوحة الثقب المعروضة، حدد وحدات عشوائية، وأدخل ثلاث مناطق للثقب.
في مربع حوار إعدادات مسار الفول، حدد هدف غمر الماء 20 × بفتحة رقمية 0.7، ونافذة طول موجة انبعاث من 576 إلى 700 نانومتر. اختر DD 488543 ، واضبط طاقة الليزر لليزر 543 على 15٪ بعد حضانة لمدة 20 دقيقة ، قم بتغيير وسيط الحضانة مرتين. بعد ذلك ، قم بإعداد غرفة التسجيل بغطاء زجاجي بورو سيليكات 0.15 ملم.
انقل حزم الألياف إلى الغرفة التي تحتوي على 200 ميكرولتر من المحلول المريح. استخدم وضع المجال الساطع للمجهر متحد البؤر لتحديد الألياف القابلة للحياة لتسجيل الفلورسنت للميتوكوندريا. اضبط واكتسب وعوض عن طريق مسح التألق باستخدام الزر Live.
اختر قيم كثافة الفلورسنت المنخفضة لخلفية تقارب صفر وحدات تعسفية وإشارة ميتوكوندريا بين 100 و 200 وحدة تعسفية. حدد حجم بكسل بين 150 إلى 190 نانومتر ، واضبط عامل التكبير / التصغير في مربع الحوار XY للحصول على العرض الكامل للألياف. في مربع حوار مكدس Z ، اضبط مسافة Z بدءا من عمق ألياف يبلغ 15 ميكرومتر حتى 22 ميكرومتر ، واختر حجم خطوة Z يبلغ 3 ميكرومتر.
انقر فوق الزر ابدأ للحصول على الصور متحدة البؤر ، واحصل على مكدس Z يتكون من ثلاث صور متحدة البؤر تم الحصول عليها بعمق 15 و 18 و 21 ميكرومتر. تظهر الصور متحدة البؤر لألياف عضلية ملتفة خالية من الدهون سجلا متوقعا لميتوكوندريا الألياف العضلية الهيكلية بنمط ألياف ثابت. في المقابل ، تظهر الألياف العضلية للفئران البدينة تغيرات كبيرة في محتوى الميتوكوندريا وتوزيعها.
