Mitochondrial Density Analysis

ابدأ بتشغيل برنامج تحليل الصور. بعد ذلك ، افتح ملف Z-stack واضبط الاتجاه لوضع الألياف أفقيا. اختر منطقة مستطيلة ذات أهمية أو عائد استثمار يغطي منطقة الميتوكوندريا.

حدد أحجاما تتراوح من 65 إلى 90 ميكرومتر في الاتجاه X والأحجام المناسبة في الاتجاه Y بناء على عرض الألياف. تابع لتكرار مكدس Z مع عائد الاستثمار المحدد. واحفظه كمكدس Z جديد بتنسيق Tiff.

احفظ موضع عائد الاستثمار من المكدس الأصلي باستخدام أداة مدير عائد الاستثمار. افتح مربع حوار العتبة باستخدام الاختصار ، Command + Shift + T. اختر خوارزمية عتبة Otsu وحدد خيار الخلفية الداكنة بالأبيض والأسود.

لاحظ الرسم البياني لتوزيع شدة التألق وقيمة العتبة المعروضة في مربع الحوار. قم بتطبيق الحد على رصة الصور الثنائية، ثم اختر حساب الحد لكل صورة وإنشاء رصة جديدة في مربع الحوار المعروض قبل النقر فوق موافق. احفظ المكدس الذي تم إنشاؤه بثلاث صور ثنائية بتنسيق Tiff. بعد ذلك ، قم بالوصول إلى قائمة التحليل وحدد الرسم البياني.

في مربع الحوار مدرج تكراري المعروض، انقر فوق نعم. وفي مربع حوار الرسم البياني للمكدس ، انقر فوق قائمة للحصول على بيانات الرسم البياني. انقل بيانات الرسم البياني إلى جدول بيانات وحدد وحدات البكسل mito بقيمة 255.

احسب كثافة الميتوكوندريا بقسمة ميتو بكسل على إجمالي وحدات البكسل والضرب في 100. قدمت ألياف الفئران البدينة كثافة أقل للميتوكوندريا. تم تأكيد ذلك من خلال تحليل صورة المكدس.