Preparation of Fungal Infected Detached Maize Leaf Sheaths for Live-Cell Imaging

للبدء ، اشطف برفق أغلفة أوراق الذرة الملقحة بجراثيم فطرية في ماء منزوع الأيونات. ضع الغمد على شريحة مجهر زجاجية نظيفة بحيث يكون السطح المحوري متجها لأسفل والسطح المحوري في الأعلى. باستخدام شفرة حلاقة أحادية الحافة ، قم بقص سنتيمتر واحد تقريبا من أطراف الغمد وإزالة معظم أنسجة الصفيحة على جانبي الضلع الأوسط.

أمسك شفرة الحلاقة بزاوية 90 درجة لحلق الأنسجة من الضلع الأوسط المحوري ، مع تعريض طبقة البشرة على السطح المحوري فوق البقعة الملقحة. ارفع قسم الغلاف بعناية من حافة واحدة وانقله إلى شريحة جديدة بحيث يكون السطح المحوري مواجها الجزء العلوي الأقرب إلى العدسة الموضوعية. ضع 60 ميكرولترا من الماء منزوع الأيونات على القسم وضع زلة غطاء زجاجي دون إدخال فقاعات هواء.

غزا Stenocarpella maydis خلايا البشرة بسرعة مباشرة عن طريق تورمات hyphal غير متمايزة. بينما أنتجت Colletotrichum graminicola appressoria الميلانية. كشف تلطيخ تريبان الأزرق عن طبيعة ومدى استعمار الخيوط الفطرية ، مع غزو C.graminicola في البداية عبر خيوط أولية سميكة ثم تحول لاحقا إلى مرحلة نخرية التغذية.

تغزو C.graminicola خلايا الذرة الحية باستخدام خيوط أولية سميكة مفصولة عن السيتوبلازم المضيف بواسطة غشاء. في المقابل ، تنتج S.maydis توكسين نباتي يقتل خلايا البشرة قبل غزوها. في C.graminicola ، أشار إنتاج الراسب البني الداكن في أغلفة أوراق الذرة إلى انفجار مؤكسد مرتبط باستجابة مقاومة المضيف.