للبدء ، خذ عينات البراز البشرية المعدة. تبريد أجهزة الطرد المركزي المبردة عالية السرعة إلى 4 درجات مئوية. استخدم PBS لضبط وزن أنابيب العينة إلى 0.1 جرام ، وأجهزة الطرد المركزي عند 3،000 جم لمدة 20 دقيقة عند 4 درجات مئوية.
باستخدام ماصة بلاستيكية ، انقل المادة الطافية إلى أنبوبين سعة 50 ملليلتر ، تاركا وراءها 1 ملليلتر. ثم ، أجهزة الطرد المركزي طاف في 12،000 غرام لمدة 30 دقيقة في 4 درجات مئوية. باستخدام حقنة 20 ملليلتر ، نضح الطاف ، وإزالة الإبرة من المحقنة.
قم بتصفية السائل من خلال مرشحات 0.22 ميكرومتر إلى أنابيب 50 ملليلتر. بعد ذلك ، امسح الدلو بنسبة 75٪ كحول للتخلص من أي تلوث متبقي. نقل ما يقرب من 30 ملليلتر من طاف البراز المصفى في أنبوب الطرد المركزي الفائق.
املأ الأنبوب بحوالي 8 ملليلتر من PBS ، تاركا فجوة 3 ملليمترات من فتحة الأنبوب. ضع أنبوبي الطرد المركزي الفائق في دلاء الطرد المركزي المتعارضة ، وقم بمعادلة وزن الدلوين باستخدام PBS. قم بتحميل جميع الجرافات على الدوار ، بغض النظر عما إذا كانت محملة بأنابيب.
ضع العينات في جهاز الطرد المركزي ، وابدأ الفراغ وقم بتدويرها عند 160،000 جم لمدة 70 دقيقة عند 4 درجات مئوية. بمجرد اكتمال الطرد المركزي ، حرر فراغ الغرفة وافتح باب جهاز الطرد المركزي الفائق. ثم قم بإزالة الدوار على الفور.
انقل الدلاء من الدوار إلى الحامل ، والتقط الأنابيب باستخدام القراص. تخلص من المادة الطافية ، واحفظ الكريات البنية المرئية. أضف 1 ملليلتر من برنامج تلفزيوني مبرد مسبقا لإعادة تعليق الكريات تماما.
املأ الأنبوب بحوالي 37 ملليلتر من PBS ، تاركا فجوة 3 ملليمتر من الفتحة. بعد إجراء جولة أخرى من الطرد المركزي الفائق ، تخلص من المادة الطافية واترك الأنبوب مقلوبا لمدة 5 دقائق. قم بإزالة أي محلول متبقي على الجدار الداخلي باستخدام المساحات.
باستخدام ماصة 1,000 ميكرولتر, أضف 1.2 ملليلتر من PBS المبردة مسبقا لإعادة تعليق الكريات, واخلطها عن طريق الماصة. انقل 1.2 ملليلتر من محلول PBS BEV من أنبوب طرد مركزي فائق إلى أنبوب صغير نظيف سعة 1.5 ملليلتر.
