Immunostaining of Agarose-Embedded Lung Tissue Sections

ابدأ بتضمين أنسجة الرئة والأغاروز وتقسيمها باستخدام الاهتزاز. إلى الأنسجة المقطعة ، أضف 300 ميكرولتر من عامل الحظر. احتضن الطبق عند أربع درجات مئوية على شاكر مع تحريك لطيف لمدة 45 دقيقة.

بعد ذلك ، قامت ماصة 300 ميكرولتر من PBS بتخفيف الأجسام المضادة الأولية في كل بئر. احتضن الطبق طوال الليل عند أربع درجات مئوية مع هز لطيف. الآن ماصة بلطف من الأجسام المضادة الأولية دون لمس الشريحة.

اغسل الشرائح ثلاث مرات باستخدام 400 ميكرولتر من برنامج تلفزيوني. بعد ذلك ، ماصة 300 ميكرولتر من الأجسام المضادة الثانوية المخففة في كل بئر. إزالة محلول الأجسام المضادة بعد الحضانة الباردة لمدة 90 دقيقة.

ثم أضف DAPI والطماطم lectin 488 إلى الآبار. احتضان الخليط لمدة 30 دقيقة. بعد إزالة DAPI و tomato lectin ، اغسل الشرائح في PBS لمدة ثلاث دورات من 10 دقائق.

باستخدام فرشاة ، انقل الشرائح إلى شريحة. ضع ثلاث قطرات من وسيط التثبيت على الشريحة وقم بتركيب غطاء فوقها قبل التصوير. كانت أقسام الرئة من عينات الفئران والخنازير والعينات البشرية ملطخة مناعيا بضمور العضلات الشوكي والإيلاستين و LEA.

لوحظ أن ضمور العضلات الشوكي والإيلاستين يتوزعان عبر هياكل مثل القنوات السنخية والأوعية الدموية والقصيبات الهوائية والحويصلات الهوائية. تم إجراء مقارنة لتوزيع الخلايا الرئوية من النوع الثاني في البشر البالغين والرضع. كان للجسم المضاد للخلايا السنخية من النوع الثاني HT2-280 تقارب قوي مع سطح خلية الخلايا الرئوية.

أسفرت عينة الرضع عن عدد أعلى بكثير من الخلايا الرئوية من النوع الثاني. ومع ذلك ، أظهرت عينة الرضع أيضا تغطية سقالة أعلى بكثير من البالغين. كما كان عدد الخلايا الرئوية من النوع الثاني على أساس تغطية السقالة أعلى بكثير عند الرضع.