Culture of bEnd.3 Cells and Cell Viability After CoCl2 Treatment

للبدء ، قم بإعداد وسط زراعة خلايا DMEM يحتوي على FBS والبنسلين والستربتومايسين. أيضا ، قم بإعداد محلول مخزون كلوريد الكوبالت 100 مليمولار بإضافة 1.30 ملليغرام من كلوريد الكوبالت إلى 100 ميكرولتر من DMSO. بعد ذلك ، قم بزرع ملليلتر واحد من خلايا BEND3 في طبق استزراع سعة 100 ملليلتر يحتوي على وسط DMEM واستزراع عند 37 درجة مئوية في جو مرطب من 5٪ ثاني أكسيد الكربون.

قم بتغيير الوسط كل يومين إلى ثلاثة أيام واستزراع الخلايا مرتين في الأسبوع. بعد أن تنمو خلايا BEND3 إلى التقاء 80٪ ، قم بهضم الخلايا بنسبة 0.25٪ من التربسين لمدة 30 ثانية. عد الخلايا باستخدام عداد الخلايا وقم بعمل تعليق للكثافة سبعة في 10 أس رابع خلايا لكل ملليلتر.

بعد ذلك ، قم بزرع 100 ميكرولتر من تعليق الخلية هذا في لوحة 96 بئرا للتصاق الخلية. ثم اغسل الخلايا باستخدام برنامج تلفزيوني وأضف 100 ميكرولتر من وسط الثقافة الذي يحتوي على كلوريد الكوبالت. ثقافة الخلايا لمدة 24 ساعة.

بعد الحضانة ، قم بإزالة الوسط واغسله باستخدام برنامج تلفزيوني. بعد ذلك ، أضف 100 ميكرولتر من محلول CCK-8. احتضان الألواح عند 37 درجة مئوية لمدة ساعة واحدة ، ثم قم بقياس الامتصاص عند 450 نانومتر باستخدام قارئ الصفائح الدقيقة.

احسب صلاحية الخلية الناتجة عن كلوريد الكوبالت وفقا لهذه الصيغة. حدد التركيز مع اختلاف كبير في تقليل صلاحية الخلية مقارنة بالمجموعة الضابطة. تم تحليل صلاحية خلايا BEND3 المعالجة بتركيزات مختلفة من كلوريد الكوبالت بواسطة CoCl2.

أشارت النتائج إلى أن 300 ميكرومولار من كلوريد الكوبالت أظهرت سمية خلوية كبيرة في المختبر.