بعد تعقيم لوحين من السيليكون ، في ظل ظروف معقمة ، قم بإزالة الألواح من كيس الأوتوكلاف وضعها في ألواح 150 ملم. أضف 400 ميكرولتر من محلول الفبرونيكتين إلى كل بئر من ألواح السيليكون. بعد ذلك ، أعد تعليق الخلايا اللحمية المتوسطة المستحثة إيجابية التصلب في وسط MSC وعد الخلايا القابلة للحياة باستخدام عداد الخلايا الآلي.
احسب حجم معلق الخلية المطلوب للحصول على 1.25 في 10 أس رابع لكل سنتيمتر مربع. قم بإزالة هذا الحجم من وسائط التمدد MSC من الأنبوب المخروطي سعة 15 ملليلتر وأضف الحجم المطلوب من تعليق الخلايا اللحمية المتوسطة المستحثة إيجابية التصلب. اقلب الأنبوب لتجانس تعليق الخلية الجديد.
أضف 400 ميكرولتر من تعليق الخلية إلى كل بئر من ألواح السيليكون. ضع الغطاء مرة أخرى على ألواح 150 ملم واحتضان الألواح عند 37 درجة مئوية لمدة 24 ساعة. للتوتر أحادي المحور ، شطف جهاز التمدد بالماء المقطر المزدوج ، متبوعا بنسبة 70٪ إيثانول.
امسح الجهاز ، وضعه في غطاء زراعة الخلايا ، وعرضه للأشعة فوق البنفسجية لمدة 15 دقيقة. بعد ذلك ، ضع لوحة واحدة في الحاضنة كتحكم ثابت. ضع لوحة السيليكون الثانية في جهاز التمدد عن طريق محاذاة البراغي مع الفتحات الموجودة في لوحة السيليكون.
ثم ضع الغطاء على الجهاز. قم بتوصيل الجهاز بلوحة السيليكون الجالسة بالمصدر الإلكتروني وضعه في الحاضنة عند 37 درجة مئوية. اضبط برنامج التمدد الدوري على 4٪ سلالة جيبية في 0.5 هرتز لمدة ساعتين في اليوم.
ابدأ التمدد بالضغط على زر البدء. أثناء التحميل الميكانيكي للخلايا اللحمية المتوسطة المستحثة إيجابية التصلب ، أدت كثافات البذر العالية بشكل مفرط إلى تقلص الخلايا المبكر وموت الخلايا المبكر. بعد عدة أيام من التمدد ، لوحظت درجة معينة من تنظيم الخلايا في مجموعة امتدت الخلايا اللحمية المتوسطة المستحثة إيجابية التصلب ، مقارنة بتنظيم الخلية العشوائي في المجموعة الثابتة.
أظهر تلطيخ Phalloidin لخيوط الأكتون أن الخلايا نمت بشكل عمودي على اتجاه التمدد ، على عكس تنظيم الخلايا العشوائي الذي لوحظ في الصفائح الثابتة. كشف تحليل التعبير الجيني عن زيادة كبيرة في تنظيم جينات التيوجينات في كل من ثلاثة وسبعة أيام ، مقارنة ب IMSCs فقط في اليوم صفر. كان ترسب الكولاجين في الوسائط بعد سبعة أيام من التمدد أعلى بشكل ملحوظ في مجموعة خلايا اللحمة المتوسطة المستحثة إيجابية التصلب مقارنة بجميع المجموعات الأخرى.
