Multicolor Immunostaining of Nasal Mucosal Tissues of Rats with Allergic Rhinitis

للبدء ، ضع أقسام الأنسجة المخاطية للفئران الملطخة بالهيماتوكسيلين والإيوزين على مرحلة المجهر. اضبط تركيز المجهر حتى تصبح الصورة مرئية بوضوح. التقط صورة الأنسجة بمعدل 40 ضعفا.

سخني المخزن المؤقت لفوسفات السيترات حتى يغلي. ثم أضف الشرائح إلى الحاوية بعد إزالتها من الحرارة. بعد التسخين لمدة ثماني دقائق حتى الغليان ، أطفئ النار لمدة ثماني دقائق ثم انتقل إلى حرارة متوسطة منخفضة لمدة سبع دقائق.

بعد السماح للحاوية بالتبريد بشكل طبيعي ، قم بنقل الشرائح إلى PBS. استخدم شاكر إزالة اللون لهز الشرائح لمدة خمس دقائق. بعد ذلك ، ارسم دائرة حول الأنسجة المجففة باستخدام قلم مناعي كيميائي.

أضف 3٪ محلول بيروكسيد الهيدروجين إلى الشرائح قبل الحضانة. ثم انقل الشرائح إلى برنامج تلفزيوني لغسلها كما كان من قبل. للحظر ، ضعي 5٪ مصل الماعز داخل الدائرة المحددة.

بعد الحضانة ، قم بإزالة محلول الحجب بعناية وأضف ملليلتر إلى ملليلتر من FOXP3 إلى شرائح الأنسجة. ثم ضع الشرائح في غرفة رطبة للحضانة طوال الليل. بعد غسل الشرائح في برنامج تلفزيوني ، جفف الشرائح برفق باستخدام ورق الترشيح.

ثم أضف واحد إلى ملليلتر من محلول الأجسام المضادة الثانوي إلى الشرائح. بعد ذلك ، احتضن الشرائح في 100 ميكرولتر من محلول عمل تضخيم إشارة التيراميد لمدة 10 دقائق في درجة حرارة الغرفة في الظلام. بعد الحضانة ، اغسل الشرائح باستخدام برنامج تلفزيوني ثلاث مرات لمدة خمس دقائق لكل منهما.

الآن ضع ملليلتر إلى ملليلتر من محلول تلطيخ DAPI على الشرائح قبل الحضانة. قم بإخماد التألق التلقائي عن طريق احتضان الشرائح في المروي لمدة خمس دقائق قبل غسل PBS لمدة 10 دقائق. ثم ختمها بسائل التبريد المضاد للتألق.

التقط الصور المجهرية للأقسام الملطخة تحت تكبير 20X و 40X. أظهر تلطيخ الهيماتوكسيلين ويوزين للفئران الضابطة خلايا ظهارية وأهداب مرتبة جيدا. تضرر الغشاء المخاطي للحاجز الأنفي وانفصل في مجموعة المرض مع تسلل العدلات الملحوظ.

كشف تلطيخ متعدد المناعي أن تعبيرات ROR Gamma T و TCAM1 قد زادت في مجموعة المرض. ومع ذلك ، كان FOXP3 تحت التعبير.