تم دعم هذا العمل من قبل إدارة العلوم والتكنولوجيا بمقاطعة سيتشوان (2021YJ0175).

حصل البروتوكول والإجراءات التجريبية على موافقة من لجنة البحوث الإدارية والحيوانية بجامعة تشنغدو للطب الصيني التقليدي (رقم السجل: 2022DL-010). تم الحصول على ذكور فئران Sprague Dawley (SD) البالغة من العمر ثمانية أسابيع ، والتي يتراوح وزنها بين 180 و 200 جم ، تجاريا (انظر جدول المواد) وتم وضعها تحت دورة الضوء / الظلام الطبيعية مع درجة حرارة مضبوطة (23 ± 2 درجة مئوية) ورطوبة نسبية (55٪ ± 10٪). تم تقسيم اثني عشر فأرا بشكل عشوائي إلى مجموعتين: المجموعة الضابطة ومجموعة AR. تأقلمت جميع الفئران مع هذه الظروف وزودت بحرية الوصول إلى الطعام والماء لمدة أسبوع واحد قبل التجربة.
1. إنشاء نموذج الفئران من AR
<ol><li>تحضير محلول التحسس: 30 مجم من البومين البيضاوي (OVA) و 3 جم من Al(OH)3 في 100 مل من المحلول الملحي (انظر جدول المواد)14,15.</li>
	<li>التحسس الأساسي: أمسك وأمسك الجرذ المستيقظ تماما مع توجيه بطنه لأعلى. تطهير البطن باستخدام 75 ٪ كرات القطن غارقة في الكحول. استخدم حقنة سعة 1.5 مل لحقن 1 مل من محلول التحسس المحضر في الخطوة 1.1 في تجويف البطن الأيسر للفئران في مجموعة AR. كرر هذا الحقن مرة كل يومين لمدة 14 يوما (الشكل 1 أ). ملاحظة: تأكد من وضع رأس الجرذ أسفل ذيله لمنع تلف الأمعاء الغليظة والدقيقة عند إدخال المحقنة. يقع موقع الحقن على بعد 1.5 سم من خط الوسط البطني. يجب أن تتلقى الفئران في المجموعة الضابطة حقنا داخل الصفاق من 1 مل من محلول ملحي طبيعي مرة كل يومين لمدة 14 يوما.</li>
	<li>تحدي الأنف: تطبيق 50 ميكرولتر من 5٪ OVA عن طريق قطرات الأنف باستخدام ماصة 100 ميكرولتر (الشكل 1B) في اليوم التالي للتحسس القاعدي ، مع تكرار هذا الإجراء لمدة 7 أيام (الشكل 1C). ملاحظة: تحضير محلول OVA بنسبة 5٪ عن طريق خلط 5 جم من OVA مع 100 مل من المحلول الملحي. بالنسبة للمجموعة الضابطة، يتم تطبيق قطرات من نفس الحجم من المحلول الملحي.</li>
</ol>2. التسجيل السلوكي للفئران
<ol><li>في غضون 30 دقيقة بعد الانتهاء من تحدي الأنف النهائي ، راقب الفئران وسجلها باستخدام كاميرا رقمية لتحديد الأعراض مثل خدش الأنف والعطس وسيلان الأنف ، بناء على معايير التسجيل الموضحة في الجدول 1 (الشكل 1 د). ملاحظة: يعتمد تأكيد نمذجة الواقع المعزز الناجحة على تحقيق مجموع نقاط ≥5 نقطة14.</li>
</ol>3. الحصول على عينات الغشاء المخاطي للأنف
<ol><li>التضحية بالفئران: التضحية بالفئران بتعريضها لجرعة زائدة من CO2. بعد ذلك ، قم بتطهير الفئران بنسبة 75٪ من الإيثانول (انظر جدول المواد). استخدم مشرطا لعمل شق على طول زاويتي الفم لكشف الأنسجة العضلية (الشكل 2 أ). بعد ذلك ، قم بقطع مفاصل العظم الوجني والفك السفلي على جانبي الجمجمة باستخدام مقص الأنسجة (الشكل 2 ب) ، وإزالة الفك السفلي (الشكل 2 ج).</li>
	<li>التعرض لتجويف الأنف: افصل جلد الفك العلوي باستخدام مرقئ (الشكل 2 د) لكشف تجويف الأنف (الشكل 2 ه). قطع الاتصال العظمي بين تجويف الأنف والفك العلوي بمقص الأنسجة (الشكل 2F). بعد ذلك ، اقطع الاتصال بين تجويف الأنف والعظام المدارية على كلا الجانبين عند الثقبة تحت الحجاج (الشكل 2G) وقم بإزالة تجويف الأنف (الشكل 2H).</li>
	<li>التثبيت: ضع تجويف الأنف المستخرج في 4٪ بارافورمالدهيد للتثبيت وقم بتخزينه في درجة حرارة الغرفة لمدة 24-72 ساعة (انظر جدول المواد). ملاحظة: تأكد من أن كمية مثبت بارافورمالدهايد المستخدمة كافية لتغطية الأقسام بالكامل للتثبيت المناسب.</li>
</ol>4. المعالجة المسبقة لعينات الغشاء المخاطي للأنف
<ol><li>إزالة الكلس: ابدأ بإصلاح الأنسجة التي تمت إزالتها من الخطوة 3.1. اغسلها ثلاث مرات باستخدام برنامج تلفزيوني لمدة 20 دقيقة لكل منهما. اتبع ذلك عن طريق غسلها ثلاث مرات بالماء المقطر ، في كل مرة لمدة 20 دقيقة. بعد ذلك ، قم بإزالة الكلس من الأنسجة في محلول إزالة الكلس بحجم 20-30 مرة من الأنسجة في درجة حرارة الغرفة.<ol><li>يجب أن يحافظ محلول إزالة الكلس (انظر جدول المواد) على درجة حموضة 7.2-7.4. أخيرا ، ضع الأنسجة منزوعة الكلس في صندوق التجفيف. ملاحظة: يجب تغيير محلول إزالة الكلس أسبوعيا. يمكن الانتهاء من عملية إزالة الكلس عندما يلين النسيج (حوالي 2 أشهر).</li>
	</ol></li>
	<li>الجفاف وإزالة الشعر بالشمع: انقل صندوق التجفيف إلى مجفف (انظر جدول المواد). ابدأ ب 75٪ كحول لمدة 4 ساعات ، تليها 85٪ كحول لمدة 2 ساعة ، و 90٪ كحول لمدة 2 ساعة ، و 95٪ كحول لمدة 1 ساعة.<ol><li>بعد ذلك ، اغمر الأنسجة في الإيثانول اللامائي لمدة 30 دقيقة ، وكرر العملية لمدة 30 دقيقة أخرى ، واستخدم الزيلين لمدة 5-10 دقائق ، وكرر هذه الخطوة لمدة 5-10 دقائق أخرى ، واغمر الأنسجة في الشمع لمدة 1 ساعة ، وكرر هذه الخطوة لمدة ساعة أخرى ، وأخيرا ، اغمر الأنسجة في الشمع لمدة 1 ساعة إضافية.</li>
	</ol></li>
	<li>التضمين: ضع كتلة الشمع المذاب في صندوق التضمين (انظر جدول المواد) وقم بتخزينها في مجمد بدرجة حرارة -20 درجة مئوية. بمجرد أن يصلب الشمع ، قم بإزالته وتقليم كتلة الشمع.</li>
	<li>التقطيع: أدخل كتلة الشمع المشذبة في ميكروتوم البارافين (انظر جدول المواد) وقطعها إلى شرائح بسمك 3 ميكرومتر. ضع الشرائح في حمام مائي على حرارة 40 درجة مئوية على مفرشة منزلقة. افرد المنديل ، ثم ارفعه بشريحة زجاجية واخبزه في فرن 60 درجة مئوية.<ol><li>بعد تبخر الماء ، وضبط الشمع بشكل صحيح ، قم بإزالة الشرائح وتخزينها عند درجة حرارة 25 درجة مئوية.</li>
	</ol></li>
</ol>5. تلطيخ H& E من الأنسجة المخاطية للأنف
<ol><li>إزالة الشمع والترطيب: ضع الشرائح في الزيلين لمدة 20 دقيقة ، كرر العملية لمدة 20 دقيقة أخرى ، الإيثانول المطلق لمدة 5 دقائق ، كرر هذه الخطوة لمدة 5 دقائق أخرى ، 75٪ كحول لمدة 5 دقائق ، وأخيرا ، اغسل لمدة 5 دقائق.</li>
	<li>تلطيخ الهيماتوكسيلين: استغني عن 100 ميكرولتر من محلول تلطيخ الهيماتوكسيلين (انظر جدول المواد) لمدة 3-5 دقائق باستخدام ماصة 100 ميكرولتر ، واشطفها لمدة 5-10 ثوان ، وأضف 100 ميكرولتر من إيثانول حمض الهيدروكلوريك 0.5٪ لمدة 10-30 ثانية ، واشطفها لمدة 5-10 ثوان ، وأضف 100 ميكرولتر من ماء الأمونيا 0.2٪ لمدة 10-30 ثانية ، واشطفها لمدة 30 ثانية. ملاحظة: بعد تلطيخ الهيماتوكسيلين ، يكون التمايز مع إيثانول حمض الهيدروكلوريك بنسبة 0.5٪ ضروريا لإزالة صبغة الهيماتوكسيلين الزائدة المرتبطة بالنواة والتي يمتصها السيتوبلازم. عند إجراء تلطيخ اليوزين ، سيتم تلطيخ النوى والسيتوبلازم بوضوح. ستظهر الشرائح باللون الأحمر أو الوردي بعد التمايز مع 0.5٪ من إيثانول حمض الهيدروكلوريك ، لذا اشطفها مباشرة بعد التمايز لإزالة الحمض من شرائح الأنسجة لوقف التمايز. ثم استخدم 0.2٪ من ماء الأمونيا لتعزيز التلوين النووي.</li>
	<li>تلطيخ Eosin: استخدم ماصة 100 ميكرولتر لتوزيع 100 ميكرولتر من محلول تلطيخ eosin (انظر جدول المواد) لمدة 5 دقائق وشطفه لمدة 30 ثانية.</li>
	<li>الجفاف والختم: اغمر الشرائح في الإيثانول المطلق لمدة 5 دقائق ، وكرر العملية لمدة 5 دقائق أخرى ، وكرر مرة أخرى لمدة 5 دقائق ، وثنائي ميثيل لمدة 5 دقائق ، والزيلين لمدة 5 دقائق. أخيرا ، ختم مع الراتنج محايد (انظر جدول المواد).</li>
	<li>وضع القسم الملون على المجهر: ضع القسم الملون على المجهر ، واضبط تركيز المجهر حتى تصبح الصورة مرئية بوضوح ، واضبط التكبير على 40x ، والتقط الصورة.</li>
</ol>6. تلطيخ مناعي متعدد الألوان للأنسجة المخاطية للأنف
<ol><li>إزالة الشمع والترطيب: اتبع نفس ما هو مذكور في الخطوة 5.1.</li>
	<li>معالجة العازلة لسترات الفوسفات: ضع المخزن المؤقت لفوسفات السيترات (الرقم الهيدروجيني 6.0) (انظر جدول المواد) في حاوية آمنة للاستخدام في الميكروويف. قم بتسخينه حتى الغليان ، ثم قم بإزالته ، ثم أضف الشرائح إلى الحاوية. ضعيه في الميكروويف على نار متوسطة لمدة 8 دقائق حتى الغليان ، وأطفئي النار لمدة 8 دقائق ، ثم انتقلي إلى نار متوسطة منخفضة لمدة 7 دقائق.<ol><li>بعد التبريد الطبيعي ، انقل الشرائح إلى PBS (درجة الحموضة 7.4) ، ورجها ، واغسلها ثلاث مرات باستخدام شاكر لإزالة اللون ، في كل مرة لمدة 5 دقائق. ملاحظة: تأكد من أن المخزن المؤقت لا يتبخر أثناء هذه العملية ، ومنع الشرائح من الجفاف.</li>
	</ol></li>
	<li>منع البيروكسيديز الداخلي: جفف الشرائح ، وارسم دائرة حول الأنسجة بقلم كيميائي مناعي (لمنع الجسم المضاد من التدفق بعيدا) ، وقم بتطبيق محلول بيروكسيد الهيدروجين بنسبة 3٪ (بيروكسيد الهيدروجين: الماء النقي = 1: 9).<ol><li>احتضان في درجة حرارة الغرفة في الظلام لمدة 15 دقيقة. بعد التبريد الطبيعي ، ضع الشرائح في برنامج تلفزيوني (درجة الحموضة 7.4) ورجها على شاكر مزيل اللون لمدة ثلاث دورات مدة كل منها 5 دقائق.</li>
	</ol></li>
	<li>الحجب: ضعي 5٪ سيروم الماعز داخل الدائرة واحتضنها لمدة 30 دقيقة.</li>
	<li>إضافة الأجسام المضادة الأولية: قم بإزالة محلول الحجب برفق ، وأضف FOXP3 (التخفيف: 1: 200 ، انظر جدول المواد) إلى الشريحة ، وضعها في غرفة رطبة. احتضان في 4 درجة مئوية بين عشية وضحاها. ملاحظة: أضف كمية صغيرة من الماء إلى الغرفة الرطبة لمنع تبخر الأجسام المضادة.</li>
	<li>إضافة الأجسام المضادة الثانوية: ضع الشرائح في برنامج تلفزيوني (درجة الحموضة 7.4) ورجها على شاكر مزيل اللون لمدة ثلاث دورات مدة كل منها 5 دقائق. جفف الشرائح برفق وضع الجسم المضاد الثانوي (الماعز المضاد للأرانب IgG H &L ، انظر جدول المواد) داخل الدائرة. احتضان في درجة حرارة الغرفة لمدة 50 دقيقة في الظلام.</li>
	<li>تحضير محلول تخفيف التيراميد: الجمع بين 100 ميكرولتر من 3٪ H 2 O2مع 100 مل من 1x TBST (انظر جدول المواد).</li>
	<li>إضافة محلول عمل TSA: امزج 1 مل من مخفف التيراميد مع 2 ميكرولتر من CY3-Tyramide لتحضير محلول عمل TSA. ضع 100 ميكرولتر من محلول عمل TSA على كل شريحة واحتضانها في درجة حرارة الغرفة في الظلام لمدة 10 دقائق. ثم اغسل الشرائح باستخدام برنامج تلفزيوني ثلاث مرات ، 5 دقائق في كل مرة. ملاحظة: قم بإعداد واستخدام حل عمل TSA على الفور ، وتخزينه في درجة حرارة 4 درجات مئوية في الظلام ؛ وهي صالحة لمدة تصل إلى 24 ساعة.</li>
	<li>كرر الخطوات 6.2-6.8: قم بالتبديل إلى تخفيف 1: 200 من RORγt (صبغة الفلورسنت FITC) ثم إلى تخفيف 1: 200 من TICAM1 (صبغة TYP620) (انظر جدول المواد).</li>
	<li>نوى DAPI الملطخة: هز الشرائح برفق لتجفيفها ، ضع محلول تلطيخ DAPI ، واحتضنها في درجة حرارة الغرفة لمدة 10 دقائق في الظلام.</li>
	<li>تبريد التألق الذاتي: ضع الشرائح في برنامج تلفزيوني (درجة الحموضة 7.4) ورجها على شاكر لإزالة اللون لمدة ثلاث دورات مدة كل منها 5 دقائق. ضع مبرد التألق الذاتي (انظر جدول المواد) على الشرائح ، وانتظر لمدة 5 دقائق ، ثم اغسله لمدة 10 دقائق.</li>
	<li>حجب: ضع الشرائح في برنامج تلفزيوني (درجة الحموضة 7.4) ورجها على شاكر مزيل اللون لمدة ثلاث دورات مدة كل منها 5 دقائق. رج الشرائح برفق لتجفيفها وأغلقها باستخدام جهاز التبريد المضاد للتألق (انظر جدول المواد).</li>
	<li>الفحص المجهري: ضع القسم الملون على المجهر ، واضبط تركيز المجهر للحصول على رؤية واضحة ، واضبط التكبير على 20x و 40x ، والتقط الصورة. ملاحظة: DAPI له طول موجة إثارة للأشعة فوق البنفسجية من 330-380 نانومتر وطول موجة انبعاث 420 نانومتر (الضوء الأزرق). يبلغ طول موجة الإثارة FITC 465-495 نانومتر وطول موجة الانبعاث 515-555 نانومتر (الضوء الأخضر). CY3 له طول موجة إثارة 510-560 نانومتر وطول موجة انبعاث 590 نانومتر (ضوء أحمر). يبلغ الطول الموجي للإثارة TYP-690 630 نانومتر وطول موجة الانبعاث 690 نانومتر (الضوء الوردي).</li>
</ol>

تألق مناعي متعدد الألوان للأنسجة الأنفية في نموذج فأر التهاب الأنف التحسسي

<ol>
	<li>Bro&#380;ek, J. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Allergic+rhinitis+and+its+impact+on+asthma+(ARIA)+Guidelines-2016+revision.">Allergic rhinitis and its impact on asthma (ARIA) Guidelines-2016 revision.</a> The Journal of Allergy and Clinical Immunology. 140 (4), 950-958 (2017).</li><li>Maurer, M., Zuberbier, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Undertreatment+of+rhinitis+symptoms+in+Europe:+findings+from+a+cross-sectional+questionnaire+survey.">Undertreatment of rhinitis symptoms in Europe: findings from a cross-sectional questionnaire survey.</a> Allergy. 62 (9), 1057-1063 (2007).</li><li>Ding, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Alpha-linolenic+acid+improves+nasal+mucosa+epithelial+barrier+function+in+allergic+rhinitis+by+arresting+CD4++T+cell+differentiation+via+IL-4R&#945;-JAK2-STAT3+pathway.">Alpha-linolenic acid improves nasal mucosa epithelial barrier function in allergic rhinitis by arresting CD4+ T cell differentiation via IL-4R&#945;-JAK2-STAT3 pathway.</a> Phytomedicine: International Journal of Phytotherapy and Phytopharmacology. 116, 154825 (2023).</li><li>Zhou, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Activation+of+NLRP3+inflammasome+contributes+to+the+inflammatory+response+to+allergic+rhinitis+via+macrophage+pyroptosis.">Activation of NLRP3 inflammasome contributes to the inflammatory response to allergic rhinitis via macrophage pyroptosis.</a> International Immunopharmacology. 110, 109012 (2022).</li><li>Watts, A. M., Cripps, A. W., West, N. P., Cox, A. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Modulation+of+allergic+inflammation+in+the+nasal+mucosa+of+allergic+rhinitis+sufferers+with+topical+pharmaceutical+agents.">Modulation of allergic inflammation in the nasal mucosa of allergic rhinitis sufferers with topical pharmaceutical agents.</a> Frontiers in pharmacology. 10, 294 (2019).</li><li>Patel, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Fungal+extracts+stimulate+solitary+chemosensory+cell+expansion+in+noninvasive+fungal+rhinosinusitis.">Fungal extracts stimulate solitary chemosensory cell expansion in noninvasive fungal rhinosinusitis.</a> International Forum of Allergy &amp; Rhinology. 9 (7), 730-737 (2019).</li><li>Granier, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Tim-3+expression+on+tumor-infiltrating+PD-1(+)CD8(+)+T+cells+correlates+with+poor+clinical+outcome+in+renal+cell+carcinoma.">Tim-3 expression on tumor-infiltrating PD-1(+)CD8(+) T cells correlates with poor clinical outcome in renal cell carcinoma.</a> Cancer Research. 77 (5), 1075-1082 (2017).</li><li>Badoua, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=PD-1-ex+pressing+tumor-infiltrating+T+cells+are+a+favorable+prognostic+biomarker+in+HPV-associated+head+and+neck+cancer.">PD-1-ex pressing tumor-infiltrating T cells are a favorable prognostic biomarker in HPV-associated head and neck cancer.</a> Cancer Research. 73 (1), 128-138 (2013).</li><li>Fedchenko, N., Reifenrath, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Different+approaches+for+interpretation+and+reporting+of+immunohistochemistry+analysis+results+in+the+bone+tissue+-+a+review.">Different approaches for interpretation and reporting of immunohistochemistry analysis results in the bone tissue - a review.</a> Diagnostic Pathology. 9, 221 (2014).</li><li>Faget, L., Hnasko, T. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Tyramide+signal+amplification+for+immunofluorescent+enhancement.">Tyramide signal amplification for immunofluorescent enhancement.</a> Methods in Molecular Biology. 1318, 161-172 (2015).</li><li>Parra, E. R., Villalobos, P., Rodriguez-Canales, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+multiple+faces+of+programmed+cell+death+ligand+1+expression+in+malignant+and+nonmalignant+cells.">The multiple faces of programmed cell death ligand 1 expression in malignant and nonmalignant cells.</a> Applied Immunohistochemistry &amp; Molecular Morphology.: AIMM. 27 (4), 287-294 (2019).</li><li>Welsh, A. W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Standardization+of+estrogen+receptor+measurement+in+breast+cancer+suggests+false-negative+results+are+a+function+of+threshold+intensity+rather+than+percentage+of+positive+cells.">Standardization of estrogen receptor measurement in breast cancer suggests false-negative results are a function of threshold intensity rather than percentage of positive cells.</a> Journal of Clinical Oncology: Official Journal of the American Society of Clinical Oncology. 29 (22), 2978-2984 (2011).</li><li>Parra, E. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Validation+of+multiplex+immunofluorescence+panels+using+multispectral+microscopy+for+immune-profiling+of+formalin-fixed+and+paraffin-embedded+human+tumor+tissues.">Validation of multiplex immunofluorescence panels using multispectral microscopy for immune-profiling of formalin-fixed and paraffin-embedded human tumor tissues.</a> Scientific Reports. 7 (1), 13380 (2017).</li><li>Miao, M., Xiang, L., Miao, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Specification+for+preparation+of+allergic+rhinitis+animal+model+(draft).">Specification for preparation of allergic rhinitis animal model (draft).</a> Chinese Traditional and Herbal Drugs. 49 (1), 50-57 (2018).</li><li>Xu, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Astragalus+polysaccharides+attenuate+ovalbumin-induced+allergic+rhinitis+in+rats+by+inhibiting+nlrp3+inflammasome+activation+and+nod2-mediated+nf-+&#954;+b+activation.">Astragalus polysaccharides attenuate ovalbumin-induced allergic rhinitis in rats by inhibiting nlrp3 inflammasome activation and nod2-mediated nf- &#954; b activation.</a> Journal of Medicinal Food. 24 (1), 1-9 (2021).</li><li>Bousquet, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Allergic+rhinitis.">Allergic rhinitis.</a> Nature reviews. 6 (1), 95 (2020).</li><li>Huang, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Expression+of+activated+signal+transducer+and+activator+of+transcription-3+as+a+predictive+and+prognostic+marker+in+advanced+esophageal+squamous+cell+carcinoma.">Expression of activated signal transducer and activator of transcription-3 as a predictive and prognostic marker in advanced esophageal squamous cell carcinoma.</a> World Journal of Surgical Oncology. 13, 314 (2015).</li><li>Leynaert, B., Bousquet, J., Neukirch, C., Liard, R., Neukirch, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Perennial+rhinitis:+An+independent+risk+factor+for+asthma+in+nonatopic+subjects:+results+from+the+European+Community+Respiratory+Health+Survey.">Perennial rhinitis: An independent risk factor for asthma in nonatopic subjects: results from the European Community Respiratory Health Survey.</a> The Journal of Allergy and Clinical Immunology. 104 (2), 301-304 (1999).</li><li>Guerra, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Rhinitis+is+an+independent+risk+factor+for+developing+cough+apart+from+colds+among+adults.">Rhinitis is an independent risk factor for developing cough apart from colds among adults.</a> Allergy. 60 (3), 343-349 (2005).</li><li>Greisner, W. A., Settipane, R. J., Settipane, G. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Co-existence+of+asthma+and+allergic+rhinitis:+a+23-year+follow-up+study+of+college+students.">Co-existence of asthma and allergic rhinitis: a 23-year follow-up study of college students.</a> Allergy and Asthma Proceedings. 19 (4), 185-188 (1998).</li><li>Pawankar, R., Mori, S., Ozu, C., Kimura, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Overview+on+the+pathomechanisms+of+allergic+rhinitis.">Overview on the pathomechanisms of allergic rhinitis.</a> Asia Pacific Allergy. 1 (3), 157-167 (2011).</li><li>Van Nguyen, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Anti-allergic+rhinitis+activity+of+&#945;-lipoic+acid+via+balancing+th17/treg+expression+and+enhancing+nrf2/ho-1+pathway+signaling.">Anti-allergic rhinitis activity of &#945;-lipoic acid via balancing th17/treg expression and enhancing nrf2/ho-1 pathway signaling.</a> Scientific Reports. 10 (1), 12528 (2020).</li><li>Ivanov, I. I., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+orphan+nuclear+receptor+ror&#947;t+directs+the+differentiation+program+of+proinflammatory+IL-17++T+helper+cells.">The orphan nuclear receptor ror&#947;t directs the differentiation program of proinflammatory IL-17+ T helper cells.</a> Cell. 126 (6), 1121-1133 (2006).</li><li>Fontenot, J. D., Gavin, M. A., Rudensky, A. Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Foxp3+programs+the+development+and+function+of+CD4+CD25++regulatory+T+cells.">Foxp3 programs the development and function of CD4+CD25+ regulatory T cells.</a> Nature Immunology. 4 (4), 330-336 (2003).</li><li>Zhou, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Instability+of+the+transcription+factor+Foxp3+leads+to+the+generation+of+pathogenic+memory+T+cells+in+Vivo.">Instability of the transcription factor Foxp3 leads to the generation of pathogenic memory T cells in Vivo.</a> Nature Immunology. 10 (9), 1000-1007 (2009).</li><li>Ziegler, S. F., Buckner, J. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Foxp3+and+the+regulation+of+Treg/Th17+differentiation.">Foxp3 and the regulation of Treg/Th17 differentiation.</a> Microbes and Infection. 11 (5), 594-598 (2009).</li><li>Yaling, Y., Gui, Y., Shuqi, Q. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Recent+research+advances+of+toll-like+receptors+and+allergic+rhinitis.">Recent research advances of toll-like receptors and allergic rhinitis.</a> Medical Recapitulate. 23 (7), 1273-1276 (2017).</li><li>Shan, H., Jie, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Correlation+between+TLR4+gene+polymorphisms+and+allergic+rhinitis.">Correlation between TLR4 gene polymorphisms and allergic rhinitis.</a> Journal of Clinical Otorhinolaryngology, Head, and Neck Surgery. 31 (13), 991-994 (2017).</li><li>Xu, O., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Immunoregulatory+mechanism+of+Treg+cells+and+TICAM-1+patients+with+severe+allergic+rhinitis.">Immunoregulatory mechanism of Treg cells and TICAM-1 patients with severe allergic rhinitis.</a> Chinese Journal of Coal Industry Medicine. 23 (3), 303-306 (2020).</li><li>Granier, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Tim-3+expression+on+tumor-infiltrating+PD-1+CD8++T+cells+correlates+with+poor+clinical+outcome+in+renal+cell+carcinoma.">Tim-3 expression on tumor-infiltrating PD-1+CD8+ T cells correlates with poor clinical outcome in renal cell carcinoma.</a> Cancer Research. 77 (5), 1075-1082 (2017).</li><li>Badoual, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=PD-1+expressing+tumor-infiltrating+T+cells+are+a+favorable+prognostic+biomarker+in+hpv-associated+head+and+neck+cancer.">PD-1 expressing tumor-infiltrating T cells are a favorable prognostic biomarker in hpv-associated head and neck cancer.</a> Cancer Research. 73 (1), 128-138 (2013).</li><li>Gustavson, M. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Development+of+an+unsupervised+pixel-based+clustering+algorithm+for+compartmentalization+of+immunohistochemical+expression+using+automated+quantitative+analysis.">Development of an unsupervised pixel-based clustering algorithm for compartmentalization of immunohistochemical expression using automated quantitative analysis.</a> Applied Immunohistochemistry &amp; Molecular Morphology. 17 (4), 329-337 (2009).</li><li>Lu, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Comparison+of+biomarker+modalities+for+predicting+response+to+PD-1/PD-L1+checkpoint+blockade:+a+systematic+review+and+meta-analysis.">Comparison of biomarker modalities for predicting response to PD-1/PD-L1 checkpoint blockade: a systematic review and meta-analysis.</a> JAMA Oncology. 5 (8), 1195-1204 (2019).</li><li>Hernandez, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Multiplex+immunofluorescence+tyramide+signal+amplification+for+immune+cell+profiling+of+paraffin-embedded+tumor+tissues.">Multiplex immunofluorescence tyramide signal amplification for immune cell profiling of paraffin-embedded tumor tissues.</a> Frontiers in Molecular Biosciences. 8, 667067 (2021).</li></ol>

ليس لدى المؤلفين ما يكشفون عنه.

التهاب الأنف التحسسي (AR) هو مرض التهابي غير معدي في الغشاء المخاطي للأنف ناتج عن مجموعة من العوامل البيئية والوراثية. لقد أصبح مصدر قلق صحي عالمي ، مما يؤثر على كفاءة العمل ، ويقلل من نوعية الحياة ، ويضعف النوم ، والوظيفة الإدراكية ، ويسبب التهيج والتعب. يؤثر الواقع المعزز على 10٪ -20٪ من سكان ...

التهاب الأنف التحسسي (AR) هو مرض التهابي مزمن غير معدي يصيب الغشاء المخاطي للأنف بوساطة الغلوبولين المناعي المحدد E (IgE) 1,2. يتميز بأعراض مثل العطس وسيلان الأنف واحتقان الأنف وحكة الأنف. مع التصنيع والتحضر ، يتزايد انتشار AR تدريجيا ، مما يؤثر على حوالي 10٪ -20٪ من سكان العالم1. تقنية التألق المناعي (IF) هي طريقة تلطيخ الفلورسنت التي تستخدم تفاعل ربط الأجسام المضادة والمستضد. يمكن استخدامه للكشف عن وقياس مستويات التوزيع والتعبير لبروتينات معينة في الأنسجة أو الخلايا البيولوجية. في أبحاث الواقع المعزز ، يمكن ل IF اكتشاف أهداف متعددة في وقت واحد ، بما في ذلك السيتوكينات المرتبطة بالواقع المعزز ، والخلايا الالتهابية ، والمستقبلات ، وأكثر من ذلك ، مما يسهل استكشاف التسبب في AR وتأثيرات الأدوية3،4،5،6.
تشبه عملية التلوين المناعي متعدد الألوان (mIF) إلى حد كبير IF، مع إضافة خطوة شطف الأجسام المضادة خلال كل جولة من التلطيخ. يتيح هذا التعديل الكشف المتزامن عن المؤشرات الحيوية المتعددة على نفس قسم الأنسجة من خلال وضع العلامات الفردية المتسلسلة وجولات متعددة من إعادة التلطيخ. يعتمد mIF على تضخيم إشارة التيراميد (TSA) ، مما يسمح بدورات متكررة من تلطيخ الفلورسنت TSA واستخدام تسخين الميكروويف لإزالة الأجسام المضادة مع الاحتفاظ بإشارات الفلورسنت 7,8. بالمقارنة مع IF التقليدي ، يقدم mIF العديد من المزايا: (1) يمكنه اكتشاف المستضدات ذات التعبير الضعيف التي يصعب تحديدها مع IF 9,10 التقليدي ؛ (2) يوفر تلطيخا عالي الجودة مع نسبة إشارة إلى ضوضاء محسنة ؛ (3) يسمح بالقياس الكمي للهياكل والمناطق ذات الأهمية الخاصة بالأنسجة11 ؛ (4) تعدد المسارات المتعددة يستخدم الأنسجة بكفاءة ويحافظ على الموارد المرضية المحدودة12 ؛ (5) يقدم التحليل متعدد المعلمات من خلال mIF رؤى أعمق في الأنسجة ، ويكشف عن المعلومات البيولوجية المخفية13.
بشكل عام ، يسمح mIF بمراقبة تعبيرات وتوزيعات المستضد المختلفة داخل نفس العينة ، مما يسهل دراسة البروتينات المستهدفة. في المستقبل ، سيجد الباحثون الذين يسعون إلى فهم التعبير عن البروتينات المستهدفة المتعددة وتوزيعها هذه التقنية خيارا قيما. توضح هذه الدراسة تطبيق mIF لتلطيخ عينات الغشاء المخاطي للأنف من الفئران باستخدام AR وتقييم إنشاء نموذج الفئران من AR.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>Al(OH)3</td>
			<td>Sollerbauer Biotechnology Co., Ltd</td>
			<td>A7130</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>75% ethanol</td>
			<td>Anhui Yiren An Co., Ltd</td>
			<td>20210107</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ammonia</td>
			<td>Chengdu Kolon Chemical Co., Ltd</td>
			<td>2021070101</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Anhydrous ethanol</td>
			<td>Chengdu Kolon Chemical Co., Ltd</td>
			<td>2022070501</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Anti-fluorescence quenching sealer</td>
			<td>SouthernBiotech</td>
			<td>0100-01</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Automatic dyeing machine</td>
			<td>Thermo scientific</td>
			<td>Varistain Gemini ES</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Carrier slides</td>
			<td>Nantong Mei Wei De Experimental Equipment Co., Ltd</td>
			<td>220518001</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Citrate-phosphate buffer&#160;</td>
			<td>Servicebio biotechnology co., Ltd</td>
			<td>G1201</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Citric acid antigen repair solution (PH 6.0)</td>
			<td>Xavier Biotechnology Co., Ltd</td>
			<td>G1201</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Coverslip</td>
			<td>Nantong Mei Wei De Experimental Equipment Co.</td>
			<td>220518001</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Coverslip</td>
			<td>Nantong Mewtech Life Science Co., Ltd</td>
			<td>CS01-2450</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CY3-Tyramide</td>
			<td>Sawell Biotechnology Co., Ltd</td>
			<td>G1223-50UL</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DAPI</td>
			<td>Sawell Biotechnology Co., Ltd</td>
			<td>G1012</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Decoloring shaker</td>
			<td>SCILOGEX</td>
			<td>S1010E</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>EDTA decalcification solution</td>
			<td>Wuhan Xavier Biotechnology Co., Ltd</td>
			<td>CR2203047</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Electric heating blast dryer&#160;</td>
			<td>Shanghai Yiheng Scientific Instruments Co., Ltd</td>
			<td>DHG-9240A</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Embedding box marking machine</td>
			<td>Thermo scientific</td>
			<td>&#160;PrintMate AS</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Embedding machine</td>
			<td>Wuhan Junjie Electronics Co., Ltd</td>
			<td>JB-P5</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fast tissue dewatering machine</td>
			<td>Thermo scientific</td>
			<td>STP420 ES</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Film sealer</td>
			<td>Thermo scientific</td>
			<td>Autostainer 360</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>FITC-Tyramide</td>
			<td>Sawell Biotechnology Co., Ltd</td>
			<td>G1222-50UL</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fluorescence microscope</td>
			<td>Sunny Optical Technology Co.Ltd</td>
			<td>CX40</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Foxp3</td>
			<td>Affinity Biosciences Co., Ltd</td>
			<td>bs-10211R</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Freezing table</td>
			<td>Wuhan Junjie Electronics Co., Ltd</td>
			<td>JB-L5</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Goat Anti-Rabbit IgG H&#38;L (HRP)</td>
			<td>Liankebio Co., Ltd</td>
			<td>GAR0072</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Goat serum</td>
			<td>Biosharp</td>
			<td>BL210A</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>H&#38;E staining kit</td>
			<td>Leagene</td>
			<td>DH0020</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Hemostatic forceps</td>
			<td>Shanghai Medical Devices Co., Ltd</td>
			<td>J31010</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Hydrochloric acid</td>
			<td>Sichuan Xilong Science Co., Ltd</td>
			<td>210608</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Immunohistochemical pen</td>
			<td>Biosharp</td>
			<td>BC004</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Microwave oven</td>
			<td>Midea</td>
			<td>M1-L213B</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Neutral gum</td>
			<td>Sinopharm Group Chemical Reagent Co., Ltd</td>
			<td>10004160</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ovalbumin&#160;</td>
			<td>Sollerbauer Biotechnology Co., Ltd</td>
			<td>A804010</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Oven</td>
			<td>Shanghai Yiheng Scientific Instruments Co., Ltd</td>
			<td>DHG-9240A</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Palm centrifuge</td>
			<td>SCILOGEX</td>
			<td>D1008E</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Paraformaldehyde</td>
			<td>Beyotime Biotechnology Co., Ltd</td>
			<td>P0099-100ml</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Pathology section scanner</td>
			<td>3DHISTECH Kft</td>
			<td>Pannoramic SCAN&#160;</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PBS buffer</td>
			<td>Biosharp</td>
			<td>G4202</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Pipette&#160;</td>
			<td>Dragon</td>
			<td>KE0003087/KA0056573</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ror&#947;t</td>
			<td>Affinity Biosciences Co., Ltd</td>
			<td>DF3196</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Scalpel</td>
			<td>Quanzhou Excellence Medical Co., Ltd</td>
			<td>20170022</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Self-fluorescent quenching agent Sudan Black B</td>
			<td>Bioengineering Co., Ltd</td>
			<td>A602008-0025</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Slicer</td>
			<td>Thermo scientific</td>
			<td>HM325</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Slicing machine</td>
			<td>Thermo scientific</td>
			<td>HM325</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Slide</td>
			<td>Nantong Mewtech Life Science Co., Ltd</td>
			<td>PC2-301</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sprague Dawley rats</td>
			<td>Sichuan Academy of Traditional Chinese Medicine</td>
			<td>SYX <img alt="Equation 1" src="/files/ftp_upload/65937/65937eq01.jpg" style="margin: auto;" /> 2023-0100</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>TICAM-1</td>
			<td>Affinity Biosciences Co., Ltd</td>
			<td>DF6289</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tissue scissors</td>
			<td>Shanghai Medical Devices Co., Ltd</td>
			<td>J22120</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tissue spreading baking sheet machine</td>
			<td>Wuhan Junjie Electronics Co., Ltd</td>
			<td>JK-6</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>TYR-690 fluorescent dyes</td>
			<td>Shanghai Rutron Biotechnology Co., Ltd</td>
			<td>RC0086-34RM</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Vortex mixer</td>
			<td>SCILOGEX</td>
			<td>SLK-O3000-S</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Water bath-slide drier</td>
			<td>Wuhan Junjie Electronics Co., Ltd</td>
			<td>JK-6</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Wax trimmer</td>
			<td>Wuhan Junjie Electronics Co., Ltd</td>
			<td>JXL-818</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Xylene</td>
			<td>Chengdu Kolon Chemical Co., Ltd</td>
			<td>2022051901</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

immunofluorescent labeling in nasal mucosa tissue sections of allergic rhinitis rats via multicolor immunoassay

التهاب الأنف التحسسي (AR) هو مرض التهابي مزمن غير معدي يصيب الغشاء المخاطي للأنف ، ويتوسط فيه في المقام الأول الغلوبولين المناعي المحدد E (IgE) ، ويؤثر على حوالي 10٪ -20٪ من سكان العالم. في حين أن التلوين المناعي (IF) كان منذ فترة طويلة تقنية قياسية للكشف عن تعبير البروتين الخاص بالمرض ، فإن تقنيات IF التقليدية محدودة في قدرتها على اكتشاف مستويات التعبير لثلاثة بروتينات أو أكثر في نفس العينة. وبالتالي ، تم تطوير تقنيات IF متعددة الألوان في السنوات الأخيرة ، والتي تسمح بوضع العلامات المتزامنة لأهداف متعددة في الخلايا أو الأنسجة.
يوفر هذا البروتوكول نظرة عامة شاملة على عملية إنشاء نموذج الفئران من AR ، والحصول على عينات الغشاء المخاطي للأنف ، والإجراءات الفنية للتألق المناعي متعدد الألوان. أظهرت جميع الفئران في مجموعة AR أعراضا نموذجية مثل العطس وسيلان الأنف وحكة الأنف ، مع تسجيل الملاحظات السلوكية ≥5 نقطة. كشف تلطيخ الهيماتوكسيلين ويوزين (H&E) عن زيادة عدد الخلايا الالتهابية وتعطيل سلامة الغشاء المخاطي للأنف في مجموعة AR. أظهر التألق المناعي متعدد الألوان (mIF) زيادة في التعبير عن RORγt و TICAM-1 ، بينما انخفض تعبير Foxp3 في أنسجة الغشاء المخاطي للأنف لفئران AR.

Allergic rhinitis (AR) is a chronic, non-infectious inflammatory disease of the nasal mucosa primarily mediated by specific immunoglobulin E (IgE)1,2. It is characterized by symptoms such as sneezing, a runny nose, nasal congestion, and nasal itching. With industrialization and urbanization, the prevalence of AR is gradually increasing, affecting approximately 10%-20% of the world&#39;s population1. The immunofluorescence (IF) technique is a fluorescent staining method that utilizes an antibody-antigen binding reaction. It can be employed to detect and quantify the distribution and expression levels of specific proteins in biological tissues or cells. In AR research, IF can simultaneously detect multiple targets, including AR-related cytokines, inflammatory cells, receptors, and more, facilitating the exploration of AR pathogenesis and the effects of drugs3,4,5,6.
The multicolor immunofluorescence (mIF) staining process closely resembles traditional IF, with the addition of an antibody elution step during each round of staining. This modification enables the simultaneous detection of multiple biomarkers on the same tissue section through sequential single-labeling and multiple rounds of re-staining. mIF is based on tyramide signal amplification (TSA), allowing for repeated cycles of TSA fluorescent staining and the use of microwave heating to remove antibodies while retaining fluorescent signals7,8. In comparison to conventional IF, mIF offers several advantages: (1) it can detect weakly expressed antigens that are challenging to identify with conventional IF9,10; (2) it provides high-quality staining with an improved signal-to-noise ratio; (3) it allows for the quantification of tissue-specific structures and regions of interest11; (4) multiplexing multiple pathways efficiently utilizes tissues and conserves limited pathological resources12; (5) multi-parameter analysis through mIF offers deeper insights into tissues, uncovering hidden biological information13.
Overall, mIF allows the observation of different antigen expressions and distributions within the same sample, facilitating the study of target proteins. In the future, researchers seeking to understand the expression and distribution of multiple target proteins will find this technique a valuable choice. This study demonstrates the application of mIF for staining nasal mucosa samples from rats with AR and evaluate the establishment of a rat model of AR.

تسليط الضوء على المؤلف: تطوير أبحاث التهاب الأنف التحسسي باستخدام التألق المناعي متعدد الألوان

وضع العلامات المناعية في أقسام أنسجة الغشاء المخاطي للأنف من فئران التهاب الأنف التحسسي عبر المقايسة المناعية متعددة الألوان

Our main research is based on a study of allergic rhinitis. Our research intends to analyze what proteins are associated with allergic rhinitis. Multicolor immunofluorescence is currently used to advance research in our field.In future studies, we will focus on the possible mechanisms of TCM in the treatment of allergic rhinitis.

تم حث ستة فئران SD بنجاح في نموذج AR من خلال حقن OVA داخل الصفاق وتحدي الأنف. تم تحفيز AR في جميع الفئران في مجموعة AR ، وهو ما يمثل 100 ٪ من المجموعة. أظهرت جميع الفئران في مجموعة AR أعراضا نموذجية مثل العطس وسيلان الأنف وحكة في الأنف. سجلت جميع الملاحظات السلوكية ≥5 نقطة (الجدول 2).
<p class="jov...

Watch this Scientific Journal Video about Advancing Allergic Rhinitis Research with Multicolor Immunofluorescence at JoVE.com

يصف هذا البروتوكول تقنية التألق المناعي متعدد الألوان لتقييم نموذج الفئران لالتهاب الأنف التحسسي.

Allergic rhinitis (AR) is a chronic, non-infectious inflammatory disease of the nasal mucosa, primarily mediated by specific immunoglobulin E (IgE), ...

يعتمد بحثنا الرئيسي على دراسة التهاب الأنف التحسسي. يهدف بحثنا إلى تحليل البروتينات المرتبطة بالتهاب الأنف التحسسي. يستخدم التألق المناعي متعدد الألوان حاليا لتطوير البحث في مجالنا.في الدراسات المستقبلية ، سنركز على الآليات المحتملة للطب الصيني التقليدي في علاج التهاب الأنف التحسسي.

immunofluorescent-labeling-nasal-mucosa-tissue-sections-allergic

Research

JoVE Journal

Medicine

Immunofluorescent Labeling in Nasal Mucosa Tissue Sections of Allergic Rhinitis Rats via Multicolor Immunoassay

1.1K Views.  Hospital of Chengdu University of Traditional Chinese Medicine. يعتمد بحثنا الرئيسي على دراسة التهاب الأنف التحسسي. يهدف بحثنا إلى تحليل البروتينات المرتبطة بالتهاب الأنف التحسسي. يستخدم التألق المناعي متعدد الألوان حاليا لتطوير البحث في مجالنا.في الدراسات المستقبلية ، سنركز على الآليات المحتملة للطب الصيني التقليدي في علاج الته...

Video: تسليط الضوء على المؤلف: تطوير أبحاث التهاب الأنف التحسسي باستخدام التألق المناعي متعدد الألوان

Allergic rhinitis (AR) is a chronic, non-infectious inflammatory disease of the nasal mucosa, primarily mediated by specific immunoglobulin E (IgE), affecting approximately 10%-20% of the world's population. While immunofluorescence (IF) staining has long been a standard technique for detecting disease-specific protein expression, conventional IF techniques are limited in their ability to detect the expression levels of three or more proteins in the same sample. Consequently, multicolor IF techniques have been developed in recent years, which allow the simultaneous labeling of multiple targets in cells or tissues.
This protocol provides a comprehensive overview of the process for establishing a rat model of AR, obtaining nasal mucosal samples, and the technical procedures for multicolor immunofluorescence. All rats in the AR group exhibited typical symptoms such as sneezing, a runny nose, and an itchy nose, with behavioral observations scoring &#8805;5 points. Hematoxylin and eosin (H&amp;E) staining revealed increased inflammatory cell counts and disrupted nasal mucosal integrity in the AR group. Multicolor immunofluorescence (mIF) demonstrated increased expression of ROR&#947;t and TICAM-1, while Foxp3 expression decreased in the nasal mucosa tissue of AR rats.

This protocol describes a multicolor immunofluorescence technique for evaluating the rat model of allergic rhinitis.

Acquisition and Pre-Processing of Nasal Mucosal Samples from Rats with Allergic Rhinitis

To begin, with a scalpel, make a precise incision along the two corners of the mouth of a euthanized rat to expose the muscle tissue. Use a pair of tissue scissors to cut the joints of the zygomatic bone and the mandible on both sides of the skull. Then remove the mandible.Use tissue scissors to cut the bony connection between the nasal cavity and the maxilla. Then use a hemostat to separate the skin of the maxilla to expose the nasal cavity. Sever the connection between the nasal cavity and the orbital bones on both sides at the infraorbital foramen, and remove the nasal cavity.Place the extracted nasal cavity in a 4%Paraformaldehyde solution for fixation. To decalcify the tissue, wash the fixed tissue with distilled water. Place the tissues in a decalcification solution with a volume 20 to 30 times that of the tissues at room temperature.Once decalcification is complete, place the tissue in a dehydration box. Transfer the dehydration box to a dehydrator and dehydrate the tissue in increasing alcohol concentrations at different incubation times. Next, place the tissue in anhydrous ethanol for 30 minutes for two cycles.Following this, transfer the tissue to xylene for five to 10 minutes and repeat, then immerse the tissue in wax for one hour. Place the wax block in embedding cassettes. Remove the wax blocks after they have solidified and trim the wax block.Insert the trimmed wax block into a paraffin microtome and cut it into three micrometer thick slices. Hematoxylin and eosin staining of the control rats showed well arranged and cilia. The nasal septum mucosa was damaged and detached in the disease group with notable neutrophil infiltration.

الحصول على عينات الغشاء المخاطي للأنف ومعالجتها مسبقا من الفئران المصابة بالتهاب الأنف التحسسي

Multicolor Immunostaining of Nasal Mucosal Tissues of Rats with Allergic Rhinitis

To begin, place the hematoxylin and eosin stained rat nasal mucosal tissue sections onto a microscope stage. Adjust the microscope's focus until the image is clearly visible. Capture the tissue image at 40X.Heat the citrate phosphate buffer until it boils. Then add the slides to the container after removing it from the heat. After heating for eight minutes until boiling, turn off the heat for eight minutes and subsequently switch to medium low heat for seven minutes.After allowing the container to cool naturally transfer the slices to PBS. Use a decolorizing shaker to shake the slices for five minutes. Next draw a circle around the dried tissue with an immunohistochemical pen.Add 3%hydrogen peroxide solution to the slices before incubating. Then transfer the slices to PBS for washing as before. To block, apply 5%goat serum within the marked circle.After incubation, carefully remove the blocking solution and add one to two milliliters of FOXP3 to the tissue slices. Then place the slices in a humid chamber for overnight incubation. After washing the slices in PBS, gently dab the slices dry with filter paper.Then add one to two milliliters of the secondary antibody solution to the slices. Next incubate the slices in 100 microliters of tyramide signal amplification working solution for 10 minutes at room temperature in the dark. After incubation, wash the slices with PBS three times for five minutes each.Now apply one to two milliliters of DAPI staining solution to the slices before incubation. Quench the auto fluorescence by incubating the slices in the quencher for five minutes before a 10 minute PBS wash. Then seal them with the anti fluorescence quencher.Capture the microscopic images of the stained sections under 20X and 40X magnification. Hematoxylin and eosin staining of the control rats showed well arranged epithelial cells and cilia. The nasal septum mucosa was damaged and detached in the disease group with notable neutrophil infiltration.Multi immunofluorescent staining revealed that the expressions of ROR Gamma T and TCAM1 were increased in the disease group. However, FOXP3 was under expressed.