للبدء ، قم بتغطية إبرة الفراشة وأنبوبها بمحلول EDTA 1٪ بوتاسيوم. قطع الأنبوب خلف الإبرة مباشرة من أجل جمع الدم بالتنقيط. ضع فأرا مخدرا على الإطار التجسيمي مع الحفاظ على التخدير من خلال قناع الوجه.
ضع وسادة تدفئة تحت ، مع الحفاظ على جزء من ذيله على اتصال مباشر مع الوسادة. حرك للخلف بحيث تواجه جانبا ، ويكون الوريد الجانبي للذيل مرئيا في الأعلى. اغمس الذيل في ماء دافئ لتوسيع الوريد الجانبي.
ثم امسح الذيل بنسبة 70٪ إيثانول. ضع ضوءا دافئا على الذيل باستخدام لمبة متوهجة عادية. أدخل إبرة الفراشة 21G في وريد الذيل الجانبي بزاوية 20 درجة إلى عمق خمسة ملليمترات.
بعد ذلك ، اجمع الدم في أنبوب جمع فراغ سعة 500 ميكرولتر يحتوي على خمسة ملليغرام من البوتاسيوم EDTA كمضاد للتخثر. قم بإزالة الإبرة ووقف تدفق الدم عن طريق الضغط على موقع البزل. إعادة الفئران إلى قفص المنزل.
بعد ذلك ، اقلب الأنبوب برفق 10 مرات لخلط مضادات التخثر في الدم. اصنع ثقوبا بعمق 1.5 سم في الجليد وضع الأنابيب فيها عموديا. في غضون ساعة واحدة من الجمع ، يقوم جهاز الطرد المركزي بطرد عينة الدم في جهاز طرد مركزي مبرد لفصل البلازما.
ثم نضح حوالي 200 ميكرولتر من البلازما ، وتجنب طبقة خلايا الدم الحمراء والبيضاء. ضع البلازما المسحوبة في أنبوب دقيق معقم سعة 0.2 ملليلتر. ضع جانبا خمسة ميكرولترات من العينة لمراقبة الجودة وقم بتخزين العينة المتبقية عند 80 درجة مئوية تحت الصفر حتى التحليل.
تم سحب الدم من الفئران في خمس نقاط زمنية باستخدام طرق مختلفة ، مثل تقنية الفراغ في اليوم 52 ، وحلب الذيل في اليوم 55 ، وتقنيات الإسقاط في الأيام من 58 إلى 64. أظهرت جودة عينات البلازما التي تم تقييمها باستخدام قياس الطيف الضوئي للأشعة فوق البنفسجية أن البلازما كانت وردية اللون مع متوسط قيمة امتصاص 0.647 عند استخدام تقنية الفراغ. وبالمثل ، أدت تقنية حلب الذيل إلى بلازما وردية اللون بمتوسط امتصاص 0.620.
في المقابل ، مع نظام سحب السقوط المدعوم بالجاذبية ، تم الحصول على عينات بلازما واضحة مع انخفاض كبير في متوسط قيم امتصاص البلازما ، مما يشير إلى أن هذا الإجراء هو الأمثل للحصول على عينات عالية الجودة للتحليلات.
