Preparation of CNS Tissue for Isolating Cells in EAE Mice

ابدأ بوضع الماوس في وضع ضعيف وتثبيت الأطراف بالإبر. ضع 75٪ إيثانول على الجسم الأمامي للحيوان. اصنع قسما طوليا من خلال الجلد واللفافة على البطن والصدر.

قطع الأضلاع parasternal وطي الصدر للحصول على حرية الوصول إلى القلب. إصلاح الصدر مطوية لأعلى مع الإبر. افتح الأذين الأيمن باستخدام المقص.

باستخدام قنية ، ضع 20 ملليلترا من برنامج تلفزيوني لمرة واحدة في البطين الأيسر لطرد الدم من خلال الأذين الأيمن المقطوع. اصنع مقطعا طوليا عن طريق قص الجلد أعلى رأس الفأر لفضح الجمجمة وتحويل الجلد حول الرأس باستخدام الملقط. شق الجمجمة بمساعدة مقص على طول خياطة السهمي.

أدخل طرف المقص على طول خط الشق لفتح الكالوت. قم بإزالة الأجزاء المتبقية من الكالوت بالملقط بحيث يتعرض الدماغ بالكامل. قم بإزالة الدماغ بعناية وضعه في مصفوفة دماغ الفئران.

قطع الدماغ إلى شرائح سهمية بسمك ملليمتر واحد باستخدام شفرة حلاقة. بمساعدة المقص ، قم بقطع العمود الفقري فوق قمة الحرقفي مباشرة. أدخل إبرة قياس 20 متصلة بحقنة سعة 20 ملليلتر تحتوي على برنامج تلفزيوني لمرة واحدة في القناة الشوكية.

اطرد الحبل الشوكي من القناة الشوكية من الذيلية إلى الجمجمة. قطع الحبل الشوكي إلى شرائح بطول 0.5 سم باستخدام مشرط. قم بتخزين تعليق خلايا الجهاز العصبي المركزي الذي يتكون من الدماغ والحبل الشوكي المقابل في طبق بتري يحتوي على ثلاثة ملليلتر من DPBS البارد.