Preparing a Vascularized Micro-Tumor System Using Human Cells for Studying Tumors and Drug Responses

للبدء ، ضع كاشف تفكك الخلايا HBSS EGM-2 و DMEM في حمام مائي 37 درجة مئوية لمدة 10 إلى 15 دقيقة. قم بإذابة الثرومبين واللامينين طوال الليل عند 4 درجات مئوية والفيبرينوجين في درجة حرارة الغرفة. أضف 1.5 ميكرولتر من الثرومبين إلى أنبوب طرد مركزي دقيق سعة 500 ميكرولتر.

ضع ألواحا عالية الإنتاجية معقمة بالأشعة فوق البنفسجية في مجفف لمدة 30 دقيقة لإزالة الهواء المحبوس في الموائع الدقيقة. ضع قارورة T75 تحت المجهر عند تكبير 4x لتأكيد التقاء الخلية وكفاءة النقل. اغسل الخلايا مرتين بخمسة ملليلتر من HBSS.

ثم أضف ملليلترا واحدا من كاشف التفكك إلى الدورق واحتضانه عند 37 درجة مئوية مع 5٪ ثاني أكسيد الكربون لمدة دقيقة إلى دقيقتين. اضغط برفق على القارورة باستخدام راحة اليد ولاحظ تحت المجهر أن جميع الخلايا قد تم رفعها. اغسل الخلايا بتسعة ملليلتر من الوسائط المناسبة وجمع التعليق في أنبوب مخروطي سعة 15 ملليلتر.

قم بإزالة حصصة صغيرة على الفور وعد الخلايا. أجهزة الطرد المركزي تعليق الخلية عند 300G وأربع درجات مئوية لمدة ثلاث إلى خمس دقائق. بعد ذلك ، قم بإزالة المادة الطافية وأعد تعليق الحبيبات في الوسائط المناسبة على الجليد.

باستخدام المعادلة المعطاة ، احسب عدد الخلايا المطلوبة. أعد تعليق الخلايا بتركيز 1 في 10 أس 6 خلايا لكل ملليلتر ، واحسب حجم الخلايا المطلوبة باستخدام المعادلة التالية. أجهزة الطرد المركزي الحجم المطلوب من تعليق الخلية كما هو موضح.

ثم ، في حجم محسوب من الفيبرينوجين ، أعد تعليق الحبيبات على الجليد.