للبدء ، ضع الألواح عالية الإنتاجية المعقمة بالأشعة فوق البنفسجية وقسامات الثرومبين في غطاء زراعة الأنسجة. ضع مزيج الفيبرين الخلوي المحضر على الثلج لإبطاء التخثر. باستخدام ماصة P20 ، ارسم ستة ميكرولترات من مزيج الفيبرين الخلوي.
ثم ضع طرف الماصة برفق في حصصة الثرومبين واخلطه مرتين دون إدخال فقاعات هواء. ارفع اللوحة عالية الإنتاجية بزاوية وأدخل طرف الماصة بسرعة في أحد منافذ التحميل. ادفع مكبس الماصة إلى المحطة الأولى بحركة سلسة وسائلة وقم بحقن مزيج الفيبرين الخلوي في حجرة الأنسجة.
تأكد من عبور الجل بالكامل عبر الحجرة. ضع اللوحة برفق بشكل مسطح دون إزالة طرف الماصة أو إزاحة الماصة. قم بإزالة طرف الماصة باستخدام يد من P20 واتركه في فتحة منفذ التحميل.
بعد دقيقتين ، قم بإزالة أطراف الماصة بحركات التواء لطيفة من منافذ التحميل وضع الغطاء على اللوحة. احتضان اللوحة لمدة 15 إلى 20 دقيقة عند 37 درجة مئوية لبلمرة الهلام. ضع جهاز الموائع الدقيقة على مرحلة المجهر لمراقبة التوزيع المتساوي للخلايا في جميع أنحاء الغرفة دون أي فقاعات هواء.
أدخل طرف ماصة P20 في M1 أو M3 واطرد أربعة ميكرولترات من اللامينين ببطء لتغطية اللوحة العلوية بأكملها. قم بإزالة طرف الماصة كما هو موضح سابقا واحتضان اللوحة عند 37 درجة مئوية في 5٪ ثاني أكسيد الكربون لمدة 10 دقائق. أضف 275 ميكرولترا من الوسائط الكاملة EGM-2 إلى الخزانات غير المنفصلة للآبار الموجودة في الصفين A و B.أدخل طرف الماصة P200 في فتحة مدخل الوسائط للآبار التي تحتوي على 275 ميكرولترا من EGM-2 واطرد ببطء 75 ميكرولترا من الوسط ، وشاهد الوسائط تنتقل عبر القناة وتظهر على الجانب الآخر.
بعد إزالة طرف الماصة ، ادفع الوسائط المتبقية من الطرف إلى خزان الوسائط. أضف 50 ميكرولترا من الوسائط لتغطية الآبار الجانبية المنخفضة بالكامل في الصفوف G و H.احتضان الألواح لمدة ساعة إلى ساعتين كما هو موضح. تحت المجهر ، حدد أي فقاعات في قنوات الوسائط وقم بإزالتها عن طريق إعادة إدخال 75 ميكرولترا من الوسائط في القنوات.
تحقق من المداخل أو المنافذ المتوسطة بحثا عن فقاعات الهواء بالعين المجردة. ثم أدخل طرف ماصة P200 في الفتحة واسحب الفقاعة للخارج عن طريق رفع المكبس. في الأعضاء الدقيقة الوعائية أو VMOs ، تم توزيع الخلايا البطانية في البداية بالتساوي داخل غرفة الأنسجة ولكن بحلول اليوم الثاني ، بدأت في التمدد والإضاءة.
بحلول اليوم الرابع ، مفاغرة الخلايا البطانية مع قنوات الموائع الدقيقة الخارجية ، وتشكيل شبكة الأوعية الدموية المستمرة. تم تأكيد وظيفة الحاجز الوعائي الضيق من خلال تعطير FITC-dextran من خلال شبكة الأوعية الدموية الدقيقة مع الحد الأدنى من التسرب. أدى تعطير الخلايا السرطانية MDA-MB-231 في VMOs إلى التصاقها بالبطانة البطانية والتسرب اللاحق في الفضاء خارج الخلية ، مما يشكل نقائل دقيقة متعددة في غضون 24 ساعة بعد التروية.
من خلال التصوير المجهري بفاصل زمني ، لوحظ تسرب الخلايا التائية إلى الفضاء خارج الخلية ل VMOs على مدار 45 دقيقة. في الأورام الدقيقة الوعائية ذات الأوعية الكاملة التكوين ، التصقت الخلايا التائية بسرعة بجدار الأوعية الدموية عند التروية.
