Micro-Colony Forming Unit Assay to Quantify Mycobacteria

لإجراء التخفيف التسلسلي باستخدام لوحة البئر ، ضع أولا معلقات المتفطرة على الصفين A و E من لوحة 96 بئرا. أضف 180 ميكرولترا من الماء منزوع الأيونات إلى الآبار المتبقية لعملية التخفيف التسلسلي. باستخدام ماصة ذات 12 قناة ، أعد تعليق التعليق في الصف A وانقل 20 ميكرولترا إلى الصف B.كرر نقل التعليق للصفين B و C حتى يتم الوصول إلى التخفيف الأخير في الصف D.بالنسبة لطلاء القطيرات الدقيقة ، استخدم ماصة متعددة القنوات من 0.5 إلى 10 ميكرولتر مع أطراف رفيعة لنقل خمسة ميكرولتر من كل صف من لوحة 96 بئرا إلى اللوحة المربعة المتوسطة الصلبة.

اسمح للقطرات بلمس الأجار قليلا ، مما يضمن النقل المناسب وتقليل احتباس السائل داخل الطرف. اترك القطرات تجف وأغلق لوحة أجار. احتضانها عند 37 درجة مئوية أثناء مراقبة نمو البكتيريا.

اختياريا ، ضع ألواح أجار في كيس بلاستيكي مغلق لمنع الجفاف. بعد ستة إلى 10 أيام من الحضانة ، تحقق من وجود مستعمرات فردية مرئية للعين المجردة. ضع اللوحة تحت مجهر مقلوب باستخدام أقل هدف تكبير.

بدلا من ذلك ، استخدم كاميرا لالتقاط صورة للقطرة ، وعد المستعمرات يدويا على الكمبيوتر باستخدام ImageJ للعد الآلي للمستعمرات. تم استخدام وحدة تشكيل المستعمرة الدقيقة أو مقايسة CFU الدقيقة لإنتاج كميات كبيرة من البيانات من كمية صغيرة من ألواح أجار. أدى استخدام الجسيمات الشحمية لتوصيل ساكوينافير إلى زيادة فعالية العلاج ضد سلالات البكتيريا الدقيقة ذات المقاومة المختلفة للأدوية.