للبدء ، حدد مغناطيسا مستطيلا مسطحا لتجميع مجموعات المغناطيس لأنماط الشريط. قطع ألواح السيليكون بسمك 2 ملم إلى مستطيلات بأبعاد 2 × 8 × 30 ملم. ثم قم بتجميع المغناطيس المستطيل وألواح السيليكون طبقة تلو الأخرى.
بالنسبة لأنماط الصفيف النقطي ، قم بتجميع المغناطيسات الأسطوانية المصغرة لضمان أن كل مجموعة مغناطيسية تتكون من 36 مغناطيسا أسطوانيا مرتبة في شبكة 6 × 6. لتحضير جهاز زراعة الخلايا ، استخدم أداة ثقب لإنشاء ثقب مستطيل 1 × 1 سم في لوحة السيليكون بسمك 2 ملم. قم بقص صفيحة السيليكون حول الفتحة لصياغة قالب دائري مع وجود الفتحة في المنتصف.
للتعقيم ، ضع القوالب في منظف بالموجات فوق الصوتية. تعقيم القوالب بالماء النقي لمدة 10 دقائق. ثم استبدل الماء ب 75٪ إيثانول لمدة 10 دقائق.
جفف القوالب في صندوق معقم على حرارة 65 درجة مئوية لمدة 60 دقيقة. بعد ذلك ، قم بتوصيل قالب السيليكون المعقم بشريحة خلية زجاجية مستديرة مقاس 25 مم ، واضغط برفق على القالب حتى يلتصق السيليكون بالزجاج. ضع مجموعات المغناطيس على 6 صفيحة بئر وضع جهاز زراعة الخلايا أعلى مجموعة المغناطيس.
لتحضير محلول حقن Gd-DTPA 30 مللي مولار ، امزج 30 ميكرولترا من Gd-DTPA مع 470 ميكرولترا من وسط زراعة الخلايا الكامل. لإنشاء أنماط الخلية ، قم بطرد مركزي تعليق HUVECs عند 200 جرام لمدة 5 دقائق. وأعد تعليق الحبيبات في وسط يحتوي على Gd-DTPA.
بعد عد الخلايا ، اضبط كثافة الخلية إلى ما يقرب من 2 مرات 10 إلى 5 خلايا لكل مليلتر باستخدام وسيط يحتوي على Gd-DTPA. امزج تعليق الخلية برفق وأضف 200 ميكرولتر إلى تجويف قالب زراعة الخلايا لإنشاء سطح سائل ممتلئ الحافة. احتضان اللوحة لمدة 3-6 ساعات حتى تلتصق الخلايا بالركيزة.
بعد الحضانة ، استبدل الوسط المحتوي على Gd-DTPA بوسط استزراع كامل وقم بإزالة جهاز زراعة الخلايا من مجموعة المغناطيس. لتحضير جهاز زراعة الخلايا لنقش الخلايا المخططة ، استبدل ألواح السيليكون السميكة من الجهاز بألواح رقيقة. بعد تصميم النوع الأول من الخلايا ، كما هو موضح سابقا ، انقل جهاز زراعة الخلايا 1 ملليمتر من المغناطيس أدناه إلى اليمين.
قم بتطبيق نفس إجراء النقش على النوع الثاني من الخلايا. وانقل جهاز زراعة الخلايا الثالثة 1 ملليمتر من المغناطيس أدناه إلى اليمين. نمط النوع الثالث من الخلايا كما هو موضح.
بعد تصميم جميع أنواع الخلايا ، اغسل الشرائح الزجاجية مرتين باستخدام 200 ميكرولتر من برنامج تلفزيوني. أخيرا ، استبدل PBS بوسيط زراعة خلية كامل. أظهرت اختبارات الجدوى التي أجريت على HUVECs المعالجة ب Gd-DTPA لمدة 12 ساعة عدم وجود انخفاض كبير في صلاحية الخلية باستثناء 50 مللي مولار Gd-DTPA ، مما أدى إلى اختلاف إحصائي ، ولكنه حافظ على معدل معيشة يبلغ حوالي 90٪ في نمط الخلايا متعدد الأنواع ، تم إنشاء نمط خلية ثلاثي من خطوط جنبا إلى جنب ومصفوفات نقطية متحدة المركز.
