بعد أن يكون المريض المشتق من عضويات المعدة جاهزا للتغليف ، ابدأ في المرور الروتيني للعضويات. أولا ، قم بإزالة الوسائط من كل بئر ، تحتوي على المواد العضوية ، المضمنة في مصفوفة الغشاء القاعدي ، والتي تتم في لوحة 24 بئرا. ثم قم بتوزيع ملليلتر واحد من وسائط DMEM F12 المتقدمة الباردة الجليدية ، مباشرة على قبة مصفوفة الغشاء القاعدي.
استمر في شفط الوسائط وتوزيعها ، حتى تنفصل جميع أجزاء القبة عن اللوحة. ثم انقل كل من الوسائط ومصفوفة الغشاء القاعدي المجزأة من البئر إلى البئر التالي وكرر العملية لجميع الآبار المخصصة للتغليف. بعد تفكيك آخر قبة مصفوفة غشاء القاعدية ، قم بتوزيع الوسائط والمزيج في أنبوب سعة 1.5 ملليلتر.
قم بتوصيل طرف 1000 ميكرولتر بماصة P1000 ثم أدخل هذا الطرف في طرف 200 ميكرولتر. باستخدام إعداد الماصة هذا ، قم بامتصاص خليط المصفوفة العضوية بقوة لأعلى ولأسفل ، حوالي 25 مرة لتفتيت الكائنات العضوية إلى قطع صغيرة. أجهزة الطرد المركزي الخليط العضوي المجزأ ، باستخدام جهاز طرد مركزي منضدية عند أربع درجات مئوية لمدة 30 ثانية عند 2000 G.باستخدام ماصة نضح الوسائط ومصفوفة الغشاء القاعدي طاف.
أضف الحجم المحسوب لمصفوفة غشاء القاعدية الطازجة إلى المواد العضوية المحببة في الأنبوب. ماصة بلطف محتوى الأنبوب صعودا وهبوطا لخلط. القسمة بسرعة ، 50 ميكرولتر من خليط المصفوفة العضوية في آبار فردية من لوحة 24 بئر.
قم بتغطية اللوحة على الفور وبحركة واحدة سلسة ، اقلب اللوحة رأسا على عقب. ضع اللوحة المقلوبة في حاضنة زراعة الأنسجة بدرجة 37 درجة مئوية لمدة 35 دقيقة للسماح لمصفوفة الغشاء القاعدي بالبلمرة. أخيرا ، أضف 500 ميكرولتر من الوسائط العضوية المعدة الدافئة مسبقا إلى كل بئر.
بحلول اليوم 20 بعد البدء ، كانت المواد العضوية جاهزة للمرور ، ويشار إليها بحجم عضوي كبير أو داخل مظلم. تركت المواد العضوية لتجاوز هذه النقاط ، وبدأت في الانهيار إلى طبقات أحادية 2D. بعد التعبئة والتغليف وإعادة بذر المعدة ، احتوت القباب على العديد من الأجزاء العضوية التي أعادت تنظيم نفسها في العديد من المواد العضوية بسرعة كبيرة.
