للبدء ، ضع أنسجة الفأر المشرحة في وسط زراعة الخلايا الباردة الذي يحتوي على 5٪ FBS. باستخدام مقص تشريح حاد ، قم بقطع الأنسجة حتى يتم الحصول على شظايا خمسة ملليمترات تقريبا. انقل الشظايا المفرومة إلى أنبوب C وأضف ملليلتر واحد من وسائط زراعة الخلايا.
قم بتحميل الأنبوب C على الجهاز المزود بمحرك وقم بتركيب لوحة حامل الأنبوب فوق قيعان الأنبوب على شكل D. قم بتثبيت أذرع الشد في لوحة الأكريليك لتثبيت الأنابيب بلوحة المحرك. لتعيين برنامج مخصص على الجهاز المزود بمحرك من القائمة الرئيسية ، اضغط على الزر الأزرق لاختيار الوضع المخصص.
في قائمة الوضع المخصص الأولى ، اضغط على الزر الأخضر لتحديد مدة الدوران الأمامي إلى 30 ثانية. ثم اضغط على الزر الأزرق لتحديد القيمة التي تظهر على الشاشة. في قائمة الوضع المخصص الثانية ، اضغط على الزر الأخضر لتحديد مدة الدوران العكسي إلى 10 ثوان.
ثم اضغط على الزر الأزرق لتحديد القيمة التي تظهر على الشاشة. في قائمة الوضع المخصص الثالثة ، اضغط على الزر الأحمر لتحديد حلقات التحديد إلى أربع مرات. ثم اضغط على الزر الأزرق لتحديد القيمة التي تظهر على الشاشة.
اضبط قرص التحكم في الجهد على 200 دورة في الدقيقة وابدأ البرنامج المخصص. بعد ذلك ، أضف إنزيم الهضم في أربعة ملليلتر من وسائط الثقافة الباردة التي تحتوي على أنسجة تشريح. مرة أخرى ، قم بتحميل الأنبوب C على الجهاز وكرر البرنامج المخصص كما هو موضح سابقا.
بعد الجري ، انقل الجهاز مع الأنابيب المحملة إلى حاضنة 37 درجة مئوية لمدة 45 دقيقة. بعد ذلك ، قم بتحميل الأنبوب C على الجهاز واضبط البرنامج المخصص على 50 دورة في الدقيقة مع الدوران الأمامي إلى 270 ثانية. عكس الدوران إلى 30 ثانية والتكرار تسع مرات.
أضف EDTA إلى تركيز نهائي قدره خمسة مليمولار إلى العينة. اضبط البرنامج المخصص على 100 دورة في الدقيقة مع الدوران الأمامي إلى 30 ثانية. عكس الدوران إلى 10 ثوان والتكرار مرتين.
بعد ذلك ، قم بتمرير تعليق الخلية من خلال مصفاة خلية 70 ميكرومتر وجمع المرشح في أنبوب 50 أو 15 ملليلتر. أجهزة الطرد المركزي تعليق الخلية المجمعة عند 300 G لمدة خمس دقائق عند أربع درجات مئوية وتجاهل المادة الطافية. أعد تعليق الحبيبات في ملليلتر واحد من محلول تحلل خلايا الدم الحمراء ، واحتضانها لمدة دقيقة واحدة.
تحييد المخزن المؤقت للتحلل مع تسعة ملليلتر من برنامج تلفزيوني بارد. مرة أخرى ، قم بطرد الخلايا وإعادة تعليق الحبيبات في المخزن المؤقت أو الوسائط المطلوبة. أظهر تعليق الخلايا المحضر بجهاز آلي وتفكك يدوي قابلية مماثلة للخلايا وإنتاجية عبر رئة الفأر والكلى وأنسجة القلب.
لم تتأثر مجموعات الخلايا المناعية مثل الخلايا التائية والخلايا المتغصنة بشكل كبير ببروتوكول العزل. أظهر تعبير علامة السطح أيضا ترددات مماثلة للخلايا التائية المعزولة في متوسط شدة مضان لعلامة عرض المستضد MHC II في الخلايا المتغصنة بين العزل اليدوي وعزل الجهاز.
