للبدء ، انقل 20 ملليلترا من عينة العنب المخمرة إلى أنبوب غطاء معقم 50 ملليلتر. ثم أضف 10 ملليلتر من الماء البارد في الأنبوب والدوامة للتجانس. أجهزة الطرد المركزي العينة عند 800 جم لمدة دقيقة واحدة عند أربع درجات مئوية.
نقل الطافع إلى أنبوب جديد 50 ملليلتر وأجهزة طرد مركزي عند 3000 غرام لمدة 20 دقيقة عند أربع درجات مئوية. بعد التخلص من المادة الطافية ، أعد تعليق الحبيبات في ملليلتر واحد من PBS. نقل تعليق الخلية إلى أنبوب غطاء المسمار 2 مليلتر وأجهزة الطرد المركزي في 14،000 غرام لمدة دقيقتين.
الآن أعد تعليق الحبيبات في 978 ميكرولتر من محلول فوسفات الصوديوم من الرقم الهيدروجيني 7.4 و 122 ميكرولتر من محلول الحمض النووي. دوامة الأنبوب ووضعه عند أربع درجات مئوية لمدة 45 دقيقة إلى ساعة واحدة. انقل ملليلترا واحدا من العينة إلى محلول تحلل أنبوب واحد وشد الغطاء.
تجانس العينة ثلاث مرات في مطحنة ضرب حبة لمدة 60 ثانية لكل منها. ثم الطرد المركزي أنبوب مصفوفة lysing E لمدة دقيقة واحدة في 16،800 G.نقل supernannt إلى microtube نظيفة وإضافة 250 ميكرولتر من محلول ترسيب البروتين إلى الأنبوب. هز الأنبوب 10 مرات لخلط المحتويات.
أجهزة الطرد المركزي العينة لمدة خمس دقائق في 16،800 G ونقل طاف إلى أنبوب معقم 15 ملليلتر. ثم أضف ملليلتر واحد من تعليق مصفوفة الربط إلى المادة الطافية واخلطها عن طريق قلب الأنابيب لمدة دقيقتين قبل وضعها في الرف لمدة ثلاث دقائق. بعد إزالة ملليلتر واحد من المادة الطافية ، أعد تعليق المصفوفة في المادة الطافية المتبقية.
نقل 600 ميكرولتر من الخليط إلى أنبوب مرشح تدور وأجهزة الطرد المركزي. ثم صب التدفق من خلال وإضافة 500 ميكرولتر من محلول الغسيل في أنبوب مرشح الدوران. قم بإزالة مرشح الدوران وضعه في أنبوب صيد جديد لمدة خمس دقائق.
بعد التجفيف ، أضف 50 ميكرولترا من الماء الدافئ الخالي من الحمض النووي على غشاء المرشح وحرك المصفوفة برفق بطرف ماصة. أجهزة الطرد المركزي في 14،500 غرام لمدة دقيقة واحدة لاستئصال الحمض النووي. قم بتحميل العينة على هلام أغاروز.
وأخيرا، قم بقياس تركيز الحمض النووي (DNA).
