للبدء ، قم بقص ورق الترشيح إلى شكل مستطيل يبلغ حوالي 17 × 20 ملم وإزالة الزوايا الأربع. بعد ذلك ، قم بإنشاء ما يقرب من سبعة × 10 ملليمترات من المركز المجوف في ورق الترشيح. قم بتوصيل حلقة متاحة تجاريا بطبقة فيلم مرنة وقم بإنشاء مركز مجوف في طبقة الفيلم المرنة.
ضع حلقة محضرة في طبق بتري 35 ملم. بعد الزراعة المسبقة ، استرجع البويضة من الحاضنة ، وضعها على محورها الطويل على صينية كرتون البيض. نظف سطح قشر البيض بالكامل باستخدام 70٪ إيثانول ، واتركه يرتاح لمدة 15 دقيقة.
امسك البيضة على محورها القصير وكسرها في الأسفل. افتح البيضة على طبق بتري نظيف 100 ملم لاستخراج محتوياتها. باستخدام ماصة ، انقل ما يقرب من 10 ملليلتر من الألبومين الرقيق إلى أنبوب سعة 15 ملليلتر لزراعة البويضات السابقة.
املأ البئر الأوسط لطبق الثقافة بالألبومين الرقيق. باستخدام المناديل الورقية ، قم بإزالة الألبومين السميك المتصل بغشاء الجنين برفق. الآن ، قم بتثبيت ورق الترشيح بعناية على غشاء vitelline ، مما يضمن محاذاة محور جسم الجنين مع المستطيل المركزي على ورق الترشيح.
قطع الغشاء المحيط بورق الترشيح بالمقص. باستخدام الملقط ، اسحب ورق الترشيح المعزول برفق بعيدا عن النير في اتجاه مائل. اقلب ورقة الترشيح رأسا على عقب لوضع الجنين مع جانبه الظهري لأسفل.
اغمر ورق الترشيح بالكامل بعناية من جانب واحد من المحور الطويل في طبق بتري 100 ملم الذي يحتوي على وسط غسيل. باستخدام ماصة نظيفة ، قم برش وسط الغسيل برفق مواز لورق الترشيح لإزالة أي صفار متبقي. بعد ذلك ، قم بإزالة ورق الترشيح بعناية من وسط الغسيل ، واستخدم المناديل الورقية لامتصاص أي وسيط زائد من حواف الجنين.
ضع ورقة الترشيح مع الجنين على طبق الاستزراع ، مع التأكد من أن الجانب الظهري للجنين متجها لأسفل. انقل طبق الثقافة إلى الحاضنة على خشبة المسرح لثقافة البيض السابقة. املأ أطباق الثقافة بوسط غسيل دافئ.
عندما يصل الجنين إلى مرحلة النمو المرغوبة ، انقل ورق الترشيح مع الجنين إلى طبق الاستزراع المملوء بوسط غسيل. ضع طبق الاستزراع في الحاضنة الموجودة على خشبة المسرح لمجهر بريلوين. لعملية المعايرة ، قم بقياس إشارة Brillouin للماء.
ثم قم بقياس إشارة بريلوين للميثانول. تحت التصوير الساطع باستخدام عدسة موضوعية أربع مرات ، اضبط نقطة إضاءة الليزر على الزوج الثاني من السوميت. بعد ذلك ، قم بالتبديل إلى عدسة موضوعية 40 مرة وقم بإجراء تعديل دقيق لنقطة الليزر إلى منتصف الأنبوب العصبي.
قم بإلغاء حظر شعاع الليزر واضبط المستوى البؤري. مسح الجنين باستخدام مرحلة انتقالية ثنائية الأبعاد والحصول على صورة بريلوين للمنطقة محل الاهتمام. بعد الانتهاء من الفحص ، قم بإزالة ورق الترشيح بعناية مع الجنين.
استخدم المناديل الورقية لامتصاص أي وسط غسيل زائد من الجنين. ضع الجنين مرة أخرى في طبق الاستزراع المملوء بالألبومين الرقيق للزراعة المستمرة. لإعادة بناء صورة Brillouin ، قم بتحميل بيانات إشارة الماء والميثانول.
انقر فوق تعيين المنطقة وحدد المنطقة بأربع نقاط لحساب معلمات المعايرة. احفظ نتائج المعايرة. قم بتحميل بيانات مسح الأجنة ، وانقر فوق ابدأ لمعالجة المعلمات.
أخيرا ، أعد بناء صورة 2-D Brillouin بناء على تحولات Brillouin لجميع وحدات البكسل. أظهر تحول بريلوين في المعامل الطولي المقدر للصفيحة العصبية مقابل عدد السوميت ووقت الحضانة زيادة في تحول بريلوين للأنسجة أثناء إغلاق الأنبوب العصبي.
