تجميع جسيمات Ha-CoV-2 عن طريق النقل المشترك للخلايا HEK293T لتحديد كمية متغيرات SARS-CoV-2

ابدأ بالحفاظ على الخلايا HEK293T و DMEM التي تحتوي على FBS المعطل بالحرارة والبنسلين والستربتومايسين في دورق T75. لعد الخلايا ، امزج 20 ميكرولترا من تعليق الخلية مع 20 ميكرولترا من محلول تريبان الأزرق. أضف 20 ميكرولترا من معلق الخلايا المختلطة بالصبغة إلى غرفة عد الخلايا واحسب عدد الخلايا لكل ملليلتر.

خلايا HEK293T البذور و 10 ملليلتر من DMEM الكامل في طبق بتري لزراعة الخلايا 10 سم. احتضان الخلايا طوال الليل في حاضنة ثاني أكسيد الكربون عند 37 درجة مئوية. في اليوم التالي ، قم بإزالة الوسط الكامل واستبدله بتسعة ملليلتر من الوسط الخالي من مصل DMEM.

باستخدام المركبات المعطاة لتجميع الجسيمات الفيروسية ، قم بإعداد خليط cotransfection. يضاف الخليط ببطء إلى طبق بتري ، ويحتضن عند 37 درجة مئوية لمدة ست ساعات. بعد الحضانة ، استبدل DMEM الخالي من المصل بوسط DMEM كامل واستمر في الحضانة للانتقال المشترك لمدة تصل إلى 48 ساعة.

ثم افصل الخلايا عن طريق سحب الماصة بشكل متكرر على سطح الطبقة الأحادية ونقل التعليق إلى أنبوب سعة 15 ملليلتر. أجهزة الطرد المركزي تعليق الخلية في 400G لمدة خمس دقائق. جمع طاف وتمريره من خلال مرشح 0.22 ميكرون.

قم بتخزين المرشح الذي يحتوي على الفيروس الكاذب Ha-CoV-2 عند 80 درجة مئوية.