تلطيخ العدلات البشرية وإعداد لوحة فحص العدلات لتحليل الخلايا الحية

بعد عزل العدلات من الدم المحيطي البشري ، أعد تعليقها في RPMI 1640 Medium في أنبوب طرد مركزي سعة 1.5 ملليلتر. إضافة ميكرولتر واحد من الحمض النووي الأحمر نفاذية الغشاء يموت إلى 1.5 ملليلتر من تعليق العدلات واحتضان في الظلام لمدة خمس دقائق. أجهزة الطرد المركزي تعليق العدلات في 2 ، 500g لمدة خمس دقائق في درجة حرارة الغرفة.

بعد الطرد المركزي ، قم بإزالة الأنبوب الذي يحتوي على العدلات المحببة ونضح المادة الطافية. أعد تعليق العدلات في ملليلتر واحد من RPMI وطردها مرة أخرى. بعد الغسيل الأخير ، أعد تعليق العدلات في ملليلتر واحد من RPMI.

أضف كمية صغيرة من تعليق العدلات إلى مقياس الدم وعدها تحت المجهر. خفف معلق العدلات إلى 1.5 مرة 10 أس خامس عدلات لكل مليلتر باستخدام RPMI. أضف أربعة ميكرولترات من واحد إلى 100 صبغة DNA خضراء غير منفذة للغشاء المخفف مسبقا إلى ملليلتر واحد من تعليق العدلات.

الاستغناء عن 100 ميكرولتر من تعليق العدلات لكل بئر في زراعة الأنسجة الصافية المعالجة 96 لوحة جيدة. أضف 100 ميكرولتر من RPMI تحتوي على كواشف تحفيز مع أو بدون مثبط في الآبار المعنية. ضع اللوحة في نظام تحليل الخلايا الحية الموجود في حاضنة ثاني أكسيد الكربون بنسبة 5٪.