بروتوكول تقسيم البذور وتقنية ترسيب المصفوفة لتحليل MALDI-IMS لبذور النخيل الصلبة

للبدء ، اغمس ثلاث بذور euterpe precatoria وثلاث بذور Euterpe edulis في ماء منزوع الأيونات لمدة 24 ساعة. بعد 24 ساعة ، قم بتشغيل cryostat ، واترك درجة الحرارة تصل إلى 20 درجة مئوية. أخرج البذور الرطبة من الماء وقطعها إلى نصفين باستخدام شفرة ميكروتوم.

تحضير محلول جيلاتين طازج ودافئ بنسبة 10٪. ضع نصف البذور على قالب ، واملأه بمحلول الجيلاتين. تجمد عند 20 درجة مئوية لمدة ساعتين قبل نقله إلى جهاز التبريد.

قم بتوصيل البذور المضمنة بدعامة cryostat باستخدام مركب درجة حرارة القطع الأمثل ، أو OCT ، واتركها لمدة 10 دقائق داخل cryostat لتصلب OCT. بعد ذلك ، أضف شريطا لاصقا نحاسيا مزدوج الوجه إلى شريحة زجاجية مطلية بأكسيد القصدير أو شريحة ITO. أنتج مقاطع بسمك 20 ميكرومتر من كل نوع ، وضعها على شريط لاصق ملتصق بشريحة زجاج ITO.

لترسيب المصفوفة، ضع الشريحة التي تحتوي على شرائح في مجفف مفرغ حتى تصل إلى درجة حرارة الغرفة. قم بعمل علامات التدريس باستخدام قلم تصحيح في كل زاوية من زوايا الشرائح ، وقم بمسح الشريحة ضوئيا باستخدام ماسح ضوئي للجدول. استخدم ميزان تحليلي لوزن 30 ملليغرام من DHB.

ثم قم بإعداد محلول ملليلتر واحد يحتوي على أجزاء متساوية من الميثانول وحمض ثلاثي كلورو الخليك 0.1٪ ، وقم بإذابة DHB الموزن في المحلول المحضر. املأ حقنة زجاجية سعة ملليلتر واحد بمحلول DHB ، وضعها على مضخة حقنة بمعدل تدفق 0.8 ملليلتر في الساعة. باستخدام أنبوب الالتقاط ، قم بتوصيل المحقنة بالتأين الكيميائي للضغط الجوي أو إبرة APCI ، ثم قم بتوصيل النيتروجين بالإبرة.

اضبط معدل التدفق على 12.5 رطل لكل بوصة مربعة. قم بتوصيل إبرة APCI بمنصة الحركة XY. تأكد من أن طرف إبرة APCI أعلى من الشريحة بأربعة سنتيمترات.

باستخدام برنامج الرسم ، اضبط منصة الحركة XY لتتبع القالب ، وانتظر حتى يكرر النظام الأساسي القالب 20 مرة.