استخراج الحمض النووي الريبي الكلي من دماغ يرقات ذبابة الفاكهة وخلايا شنايدر S2

للبدء ، قم بإزالة PBS من أدمغة ذبابة الفاكهة المشرحة عن طريق الطرد المركزي القصير. ثم أضف 600 ميكرولتر من محلول تحلل الحمض النووي الريبي إلى العينة وقم بتجانسها 10 مرات باستخدام مدقة بلاستيكية. افحص الأنبوب تحت مجهر ستيريو بحثا عن التحلل الكامل.

جهاز طرد مركزي عند 1000 جم لمدة 5 دقائق عند 4 درجات مئوية لإزالة حطام الأنسجة. نقل الطافي الذي تم تطهيره إلى أنبوب طرد مركزي دقيق جديد. اعزل الحمض النووي الريبي باستخدام مجموعة تحضير الحمض النووي الريبي الدقيقة باتباع تعليمات الشركة المصنعة.

بالنسبة لخلايا S2 ، قم بإزالة PBS وعزل الحمض النووي الريبي. تحديد نقاء الحمض النووي الريبي وكميته عن طريق قياس نسبة الكثافة الضوئية عند 260 و 280 نانومتر. لتحضير العينة للرحلان الكهربائي ، قم بتخفيف عينة الحمض النووي الريبي إلى 40 نانوجرام لكل ميكرولتر وأضف صبغة تحميل الحمض النووي الريبي.

تسخين العينات عند 70 درجة مئوية لمدة 5 دقائق. في هلام الأغاروز ، قم بتحميل سلم الحمض النووي الريبي والعينات. قم بإجراء الرحلان الكهربائي في المخزن المؤقت MOPS عند 100 فولت لمدة 60 دقيقة ، وتصور الجل على جهاز نقل الأشعة فوق البنفسجية.

أظهر تصور الحمض النووي الريبي المعزول من أدمغة يرقات ذبابة الفاكهة عن طريق الرحلان الكهربائي للأغاروز نطاقا واحدا من الحمض النووي الريبي عند حوالي 600 نيوكليوتيد ، مما يشير إلى تحضير الحمض النووي الريبي السليم.