بولي أ قياس طول الذيل للجينات من ذبابة الفاكهة الدماغ

لبدء مخلفات G / I ، قم بإعداد خليط سعة 20 ميكرولتر على الجليد مع إجمالي الحمض النووي الريبي ومزيج عازلة الذيل ومزيج إنزيم الذيل. احتضان عند 37 درجة مئوية لمدة 60 دقيقة في دورة حرارية. ثم أضيفي محلول توقف الذيل واتركيه على الثلج لمدة دقيقتين.

إجراء النسخ العكسي وتضخيم PCR. بعد الرحلان الكهربائي للهلام عالي الدقة لمنتجات PCR ، يمكنك الوصول إلى البيانات باستخدام البرنامج. افتح ملف XAD وحدد أسماء النماذج أو السلم في لوحة عرض الشجرة.

قم بتكبير وتصغير مخططات الكهرباء والصور الشبيهة بالهلام للحصول على عرض مفصل. للحصول على أحجام الذروة ، افتح مخطط كهربية العينة المحددة. انقر بزر الماوس الأيمن على مخطط كهربية الفيروجرام وحدد التكامل اليدوي لتحديد القمم يدويا عن طريق سحب الخط الأفقي.

لاحظ قيم الذروة في جدول الذروة وحدد القمة ذات الارتفاع الأكبر. قم بتمكين أيقونة إظهار / إخفاء نقاط التعيين في القائمة العلوية. ستظهر لوحة جديدة على الجانب الأيمن.

حدد خيارات متقدمة ، وقم بالتمرير لأسفل إلى إجراء تحليل اللطاخة وحدد خانة الاختيار. سيؤدي هذا إلى إضافة جدول المنطقة إلى علامة التبويب مخطط كهربية الفيروجرام. ثم حدد مخطط كهربية وانتقل إلى جدول المنطقة.

في قائمة من الزوج الأساسي وإلى الزوج الأساسي ، قم بتعيين زوج البداية والنهاية الأساسي بالنقر بزر الماوس الأيمن على مخطط كهربية الفيروجرام وتحديد منطقة لإضافتها. انقر بزر الماوس الأيمن فوق أي خلية في جدول المنطقة وحدد تعديل المناطق لإنشاء نافذة منبثقة جديدة صغيرة لتعيين مناطق مخصصة. استخدم هذه المعادلة لحساب طول ذيل poly(A) على mRNA محل الاهتمام.

بعد ذلك في علامة التبويب مخطط كهربية ، تحقق إظهار الأحجام لتحويل جدول المنطقة تلقائيا من الزوج الأساسي إلى وقت التشغيل. افتح ملف CSV وحدد القيم التي تم الحصول عليها لوقت التشغيل لإنشاء رسم بياني. باستخدام هذا البروتوكول ، تم تحليل أطوال ذيل poly (A) لجينات Dscam1 و GAPDH من أدمغة يرقات ذبابة الفاكهة بينما أظهرت منتجات تفاعل البوليميراز المتسلسل من أزواج أولية خاصة بالجينات نطاقا واحدا.

أظهرت منتجات تفاعل البوليميراز المتسلسل من أزواج التمهيدي العالمية الخاصة بالجينات أنماطا مميزة من اللطاخة ، مما يشير إلى الطول التفاضلي poly (A) ل mRNAs. تم الحصول على متوسط أطوال ذيل بولي (A) باستخدام تحليل اللطاخة. وتم تمثيل نطاق أطوال الذيل بواسطة الفيروجرامات.

وبالمثل ، أظهر تحليل طول الذيل poly (A) على خلايا S2 أطوال ذيل poly (A) التفاضلية لجينات SV43 Prime UTR و GAPDH.