تفاعلات التعبير الخالية من الخلايا السائبة مع الحويصلات الصغيرة أحادية الصفيحة (SUVs) لتطبيقات الخلايا الاصطناعية

للبدء ، قم بنفخ تيار لطيف من الأرجون في قنينة زجاجية تحتوي على دهون POPC أثناء تدوير القارورة برفق. عندما تجف الدهون كفيلم في الجزء السفلي من القارورة ، قم بتغطيتها بشكل فضفاض ، ثم انقلها إلى المجفف. بعد ساعة واحدة أضف 0.5 ملليلتر من الماء منزوع الأيونات عالي النقاء لإذابة طبقة الدهون.

دوامة الحل لمدة دقيقتين. بعد ذلك ، انقع دعامتين للمرشح وماء منزوع الأيونات. ضعها على كل من دعامات الغشاء الداخلي.

ثم ضع مرشح بولي كربونات 100 نانومتر بين دعامتي الغشاء الداخليين ، مثبتين معا بواسطة الغلاف الخارجي للطارد وصامولة التجنيب. ضع الإعداد في حامل الطارد لإنهاء إعداد جهاز البثق الصغير. بعد ذلك ، قم بتحميل مزيج الماء الدهني في حقنة ضيقة سعة ملليلتر واحد.

استخدم مشابك الذراع المتأرجحة لتثبيت المحقنة في أحد طرفي الطارد الصغير. أدخل المحقنة الثانية في الطرف الآخر من الطارد الصغير ، مع التأكد من أنها مكتئبة تماما. الآن قم بتمرير مزيج الماء الدهني من المحقنة الأصلية إلى المحقنة الفارغة من خلال الجهاز.

بعد تكرار البثق 11 مرة ، انقل سيارات الدفع الرباعي إلى أنبوب طرد مركزي صغير سعة 1.5 ملليلتر. لتجميع بروتوكول التعبير الخالي من الخلايا ، تقوم الماصة بحل ترميز بلازميد الحمض النووي من واحد إلى 3 ل SFGFP القابل للذوبان أو متغيرات مستقبلات الغلوتامات SFGFP و RNAse الفئران ومحلول SUV في قنينة. أضف ماء منزوع الأيونات عالي النقاء ليصل حجم التفاعل إلى 20 ميكرولتر.

انقل محلول التعبير الخالي من الخلايا إلى صفيحة سفلية مخروطية الشكل 96 جيدا. احتضن اللوحة في قارئ لوحة عند 37 درجة مئوية لمدة أربع إلى خمس ساعات. قم بإعداد قارئ اللوحة بكسب 100 ، وإثارة 485 نانومتر ، وانبعاث 528 نانومتر ، ووقت تشغيل مدته خمس ساعات ، وقياس فاصل زمني لقراءة واحدة لكل دقيقتين.

قم بقياس إشارة GFP كل دقيقتين لمراقبة التفاعل الخالي من الخلايا في الوقت الفعلي. كان SFGFP القابل للذوبان أعلى تعبير بين البروتينات الثلاثة.