للبدء ، خذ خلايا 293 قدما مزروعة في طبق 10 سم ، واستنشق الوسائط. اغسل الخلايا بخمسة ملليلتر من برنامج تلفزيوني. ثم أضف ملليلتر واحد من التربسين EDTA ، واحتضن لمدة 3-5 دقائق عند 37 درجة مئوية لفصل الخلايا عن الطبق.
بعد الحضانة ، أضف تسعة ملليلتر من DMEM الكامل إلى الخلايا لتحييد التربسين. ماصة صعودا وهبوطا بشكل متكرر لتوليد تعليق خلية واحدة متجانسة ، ونقل الخلايا إلى أنبوب 15 ملليلتر. انقل على الفور 20 ميكرولترا من الخلايا إلى أنبوب سعة 1.7 ملليلتر ، واخلطها مع 20 ميكرولترا من صبغة تريبان الزرقاء.
عد الخلايا باستخدام عداد الخلايا الآلي أو مقياس الدم. نقل الحجم المناسب من الخلايا إلى أنبوب 50 ملليلتر ، وتخفيفها في DMEM كاملة. أضف ملليلتر من تعليق الخلية إلى كل بئر من صفيحة من ستة آبار.
احتضان الخلايا عند 37 درجة مئوية و 10٪ ثاني أكسيد الكربون بين عشية وضحاها. قبل النقل ، قم بتخفيف نانولوسيفيراز CRAF وبلازميدات هالة زيتا 1433 ، جنبا إلى جنب مع ناقل فارغ pCDNA3 في المخزن المؤقت TE. قم بتسمية مجموعة من الأنابيب المعقمة سعة 1.7 ملليلتر.
أضف 100 ميكرولتر من وسائط النقل إلى كل أنبوب ، جنبا إلى جنب مع تركيبات التعبير. الآن إضافة اثنين ميكرولتر من كاشف النقل ، ودوامة بلطف لخلط. قم بتدوير الأنابيب لفترة وجيزة في جهاز طرد مركزي دقيق ، ثم احتضان الأنابيب عند حوالي 25 درجة مئوية لمدة 15 دقيقة للسماح بتكوين مجمعات النقل.
بعد ذلك ، أضف مجمعات النقل إلى الخلايا بالتنقيط ، واحتضانها عند 37 درجة مئوية لمدة 16-20 ساعة للتعبير عن الهالة والبروتينات النانوية.
