للبدء ، قم بترتيب جميع المواد اللازمة لتمرير الأمعاء المعوية البشرية ، أو HIEs ، على منصة العمل. خلط HIEs مع عامل النمو خفضت مصفوفة ثقافة 3D. بذر الخليط على صفيحة 24 بئر مع ثلاث قطرات من 10 ميكرولتر من مصفوفة الاستزراع ثلاثية الأبعاد لكل بئر واحتضانها لمدة 20 دقيقة عند 37 درجة مئوية.
ثم أضف 350 ميكرولتر من وسط نمو HIE. بعد سبعة أيام ، اجمع HIEs من أربعة آبار في أنابيب سعة 1.5 ملليلتر. أجهزة الطرد المركزي HIEs في 2000g لمدة 40 ثانية لإزالة الحطام.
باستخدام ماصة ، قم بإزالة مصفوفة ثقافة 3D المفرطة من الأنبوب. أضف 0.5 ملليلتر من برنامج تلفزيوني بارد في الأنبوب. باستخدام حقنة أنسولين واحدة ملليلتر ، ضع الاضطراب الجسدي عن طريق الحقن حتى 10 مرات لفصل HIEs.
قم بطرد مركزي HIEs المنفصلة عند 2000 جرام لمدة 40 ثانية وقم بإزالة المادة الطافية برفق. ثم ضع الأنبوب على الثلج لمدة ثلاث دقائق تقريبا. إضافة عامل النمو خفضت مصفوفة ثقافة 3D إلى الأنبوب ومزجها مع بيليه.
بذر خليط HIEs في مصفوفة الثقافة ثلاثية الأبعاد في وسط طبق دائري 35 ملم. احتضان الطبق عند 37 درجة مئوية لمدة 20 دقيقة لترسيخ مصفوفة الثقافة ثلاثية الأبعاد. ثم أضف ملليلتر من وسط النمو العضوي المعوي قبل التسخين إلى الطبق واحتضانه عند 37 درجة مئوية مع 5٪ ثاني أكسيد الكربون لمدة 48 ساعة.
في اليوم الثالث ، استبدل وسط النمو بمليلتر من وسط التمايز قبل التسخين واحتضانه عند 37 درجة مئوية ب 5٪ ثاني أكسيد الكربون لمدة 48 ساعة. في اليوم الخامس ، استبدل وسط الأمعاء بملليلتر من وسط التمايز قبل التسخين واستمر في الحضانة لمدة 24 ساعة.
