للبدء ، حدد وسط نمو الديدان الخيطية أو صفيحة NGM التي تشغلها يرقات Caenorhabditis elegans المتعطشة L1. باستخدام ملليلتر واحد من الماء المعقم ، اغسل الديدان من اللوحة برفق. قسمة ما يقرب من 300 ميكرولتر من سكان الدودة على ألواح NGM المصنفة بتركيز OP50.
اترك الألواح تجف باستخدام مجفف الأطباق أو موقد بنسن ، ثم احتضانها عند 20 درجة مئوية حتى يصبح عدد كبير من السكان بالغين. لجمع الديدان ، اغسلها من الطبق بما يصل إلى 10 ملليلتر من الماء المعقم وانقل خليط الماء الدافئ إلى أنبوب مخروطي سعة 15 ملليلتر. اترك الديدان تستقر عن طريق الجاذبية في قاع الأنبوب لمدة أربع دقائق تقريبا.
باستخدام طرف ماصة صغير ، استنشق بعناية وتجاهل المادة الطافية. ثم أضف ما يصل إلى 15 ملليلتر من الماء المعقم. بعد الغسيل النهائي ، قم بإزالة المادة الطافية وأضف خمسة ملليلتر من محلول طازج من المبيض وهيدروكسيد الصوديوم.
احتضان الديدان لمدة خمس دقائق في درجة حرارة الغرفة أثناء الدوامة كل دقيقة لمدة 10 ثوان على الأقل. مراقبة التقدم باستخدام مجهر تشريح. بمجرد أن ينفتح جميع البالغين أو يذوبون ، أضف المخزن المؤقت M9 لتحييد التفاعل ، وبذلك يصل الحجم النهائي إلى 15 ملليلتر.
ثم طرد مركزي الأنبوب لمدة دقيقتين عند 1،300 G.اغسل البيض مرتين أخريين باستخدام 13 ملليلتر من المخزن المؤقت M9 عبر الطرد المركزي متبوعا بغسل واحد ب 15 ملليلتر من المخزن المؤقت الكامل S. ثم الطرد المركزي البيض لمدة دقيقتين في 1،300 G.بعد الطرد المركزي ، استنشاق طاف وإضافة 10 ملليلتر من المخزن المؤقت الكامل S. قم بتدوير الأنبوب برفق في درجة حرارة الغرفة طوال الليل باستخدام متحولة أو جهاز مشابه.
باستخدام مجهر تشريح ، قم بتقييم ما إذا كانت الديدان قد فقست. عد الديدان في قطرات 10 ميكرولتر من المخزن المؤقت S تحت المجهر. تحضير خليط دودة سائلة مع 60 دودة لكل ملليلتر في وسط S الكامل يحتوي على كاربينيسيلين ، أمفوتريسين B ، و OP50.
أضف 120 ميكرولترا من الوسط مع الديدان إلى الصفوف من A إلى G ولا توجد ديدان متوسطة للصف H.ثم أغلق اللوحة بشريط مانع للتسرب لمنع التلوث والتبخر. احتضان الألواح المختومة لمدة 65 ساعة تقريبا عند 20 درجة مئوية حتى تصبح ديدان L4. أضف 30 ميكرولترا من محلول مخزون فلوروديوكيوريدين 0.6 مليمول إلى كل بئر لتعقيم في مرحلة L4.
أعد إغلاق اللوحة باستخدام سدادات الشريط وحركها لمدة 20 دقيقة عند 800 دورة في الدقيقة على شاكر لوحة المعايرة الدقيقة. أعد اللوحات إلى حاضنة 20 درجة مئوية. في اليوم التالي ، أضف الدواء الذي يهم ثقافة اليوم الأول.
أعد إغلاق الألواح باستخدام مانع تسرب الشريط ورجها لمدة 20 دقيقة عند 800 دورة في الدقيقة على شاكر اللوحة. ثم بعد إزالة الغطاء والختم ، قم بقياس OD600 في قارئ لوحة لقياس اليوم الأول. أعد إغلاق الألواح وأعدها إلى حاضنة 20 درجة مئوية.
باستخدام مجهر مقلوب ، ويفضل أن يكون ذلك بهدف مرتين، عد عدد الديدان في كل بئر وسجل الأرقام في جدول بيانات. بعد العد ، أعد اللوحات إلى حاضنة 20 درجة مئوية. أظهر منحنى استجابة الجرعة تغيرا كاملا في تناول الطعام كدالة لتركيز السيروتونين أن سلالة N2 يمكن أن تفرط في تناول الطعام بطريقة تعتمد على الجرعة.
يظهر متحولة daf-16 mu86 تغذية قاعدية أعلى من N2. ومع ذلك ، لا يمكن أن تستجيب للسيروتونين بنفس الطريقة التي تعتمد على الجرعة مثل سلالة N2. لوحظ اختلاف كبير في تناول الطعام للديدان المعالجة باللوكسابين ولكنها تتغذى على البكتيريا التي قتلتها الأشعة السينية أو أشعة جاما أو بارافورمالدهيد. أظهرت مقارنة المدخول الغذائي لسلسلة من السلالات الجينية أن طفرات exc-4 و cgr-1 تأكل أقل بينما تأكل طفرات srp-6 أكثر.
