بذر رقائق الأعضاء بالخلايا الليفية الرحمية البشرية (HUFs) لدراسة الميكروبيوم المهبلي الحي

للبدء ، خذ 70 إلى 90٪ من ثقافة متقاربة من الخلايا الليفية الرحمية البشرية. نضح الوسط من القوارير. اغسل الخلايا بخمسة ملليلتر من DPBS الخالي من الكالسيوم والمغنيسيوم الدافئ.

بعد استنشاق DPBS ، ماصة أربعة ملليلتر من التربسين الدافئ EDTA في كل قارورة. احتضان الخلايا عند 37 درجة مئوية لمدة ثلاث إلى خمس دقائق حتى تنفصل الخلايا. بعد ذلك ، أضف ستة ملليلتر من القطرات ومحلول معادلة في كل دورق.

ثم انقل تعليق الخلية إلى أنبوب مخروطي سعة 15 ملليلتر. استخدم ماصة لخلط التعليق جيدا وأخذ حصة 10 ميكرولتر لعد الخلايا. امزج 10 ميكرولتر من تعليق الخلية مع 10 ميكرولتر تريبان بلو.

نقل تعليق الخلايا الملطخة إلى مقياس الدم لعد الخلايا. الطرد المركزي التالي تعليق الخلية عند 300 G لمدة خمس دقائق في درجة حرارة الغرفة. بعد استنشاق المادة الطافية ، أعد تعليق الحبيبات في وسط الخلايا الليفية الدافئة.

الآن اغسل القناة القاعدية لرقاقة جهاز الموائع الدقيقة مع 200 ميكرولتر من وسط الخلايا الليفية. ثم اغسل القناة القمية ب 200 ميكرولتر من الوسط الظهاري المهبلي الدافئ. أضف 200 ميكرولتر من الوسط الظهاري المهبلي الكامل إلى مدخل القناة القمية ، مع توصيل المخرج بطرف ماصة.

قم بتوزيع الوسط حتى تتساوى أحجام طرف المدخل والمخرج. ثم حرر طرف الماصة من الماصة ، تاركا الطرف في المدخل. ماصة ببطء 50 ميكرولتر من تعليق الخلايا الليفية الرحمية البشرية في مدخل القناة القاعدية ، مع استنشاق في وقت واحد من المخرج.

قم بإزالة طرف الماصة من المدخل عندما يبقى ما يقرب من ميكرولتر من تعليق الخلية في طرف الماصة. اقلب رقائق القابس رأسا على عقب على رف أنبوب سعة 15 ملليلتر. تحقق من الرقائق بعد الحضانة لمرفق الخلية.

بعد ذلك ، قم بتوصيل مخرج القناة القاعدية بطرف ماصة. ثم أضف 200 ميكرولتر من وسط الخلايا الليفية إلى مدخل القناة القاعدية دون الضغط على مكبس الماصة. حرر الطرف من الماصة للسماح للوسيط بالتدفق بحرية عبر القناة إلى طرف ماصة المخرج عن طريق تدفق الجاذبية.

احتضان رقائق الخلايا الليفية المصنفة طوال الليل عند 37 درجة مئوية مع مكملات ثاني أكسيد الكربون بنسبة 5٪.