ربط رقائق الأعضاء المصنفة بالخلايا الليفية الرحمية البشرية بالقرون وتمايز الخلايا الظهارية المهبلية لدراسة الميكروبيوم المهبلي الحي

للبدء ، خذ 50 ملليلتر لكل منهما ، وسط الخلايا الليفية ووسط ظهاري مهبلي ، في أنابيب مخروطية منفصلة سعة 50 ملليلتر. قم بإزالة الغازات من الوسائط الدافئة تحت فراغ معقم لمدة خمس دقائق. بعد ذلك ، تطهير الصواني النظيفة باستخدام CaviCide والإيثانول لوحدة التدفق الديناميكي.

قم بإزالة القرون من العبوة وضعها في صواني وحدة التدفق الديناميكي. ماصة ملليلتر من الوسط الظهاري المهبلي المفرغ في خزان المدخل القمي. وأضف ثلاثة ملليلتر من وسط الخلايا الليفية المنزوعة الغازات إلى خزان المدخل القاعدي.

ماصة 500 ميكرولتر من الوسط الظهاري المهبلي المنزوع الغازات إلى خزان المخرج القمي و 500 ميكرولتر من وسط الخلايا الليفية المنزوعة الغازات إلى خزان المخرج القاعدي. حرك الأدراج التي تحتوي على كبسولات في وحدة التدفق الديناميكية. الآن ، قم بتشغيل الدورة الأولية مرتين.

إذا لم تتشكل قطرة بعد أربع دورات أولية ، فقم بإجراء اتصال مباشر مع المنفذ داخل خزان مخرج الكبسولة. ماصة 200 ميكرولتر من الوسط المعني للسماح للوسط بالتدفق بين الخزان في القناة لتجهيز القرون يدويا. بعد ذلك ، قم بإزالة أطراف الماصة من رقائق الأعضاء المصنفة بالخلايا الليفية الرحمية البشرية.

ضع قطرة من الوسيط المعني على جميع منافذ كل شريحة. حرك الرقائق في القرون وضع القرون على الصواني. قم بشفط أي وسائط على سطح الرقائق ، ثم حرك كل درج إلى وحدة تدفق ديناميكية.

بعد ذلك ، في الوحدة ، اضبط الجزء العلوي والسفلي كسائل ، والتدفق القمي إلى 15 ميكرولتر في الساعة ، والتدفق القاعدي إلى 30 ميكرولتر في الساعة ، والامتداد إلى 0٪ والتردد إلى صفر هرتز. قم بتشغيل دورة التنظيم على الوحدة والسماح بالتدفق بين عشية وضحاها. لوحظت ورقة مستمرة من الخلايا الظهارية المهبلية التي شكلت تدريجيا طبقات خلايا متعددة بعد التمايز على جهاز رقاقة الجهاز.