للبدء ، ضع مستلق الماوس الرحيم على لوحة التشريح. باستخدام دبابيس تشريح T تأمين منصات القدم من الماوس إلى اللوحة. مع مقص تشريح جراحي ، شق أسفل البطن وقطع حتى الذقن.
بعد فصل الجلد عن البطانة البريتونية ، قم بتمديده بشكل عمودي بعيدا عن الجذع وتثبيته. باستخدام ملقط حاد ، قم بإزالة الغدد الليمفاوية العنقية والمحورية والعضدية والأربية بعناية ، وكذلك الطحال ووضعها في مصفاة خلية 70 ميكرومتر تحتوي على ملليلتر من وسط R9. لتحضير تعليق خلية واحدة ، قم بلف أداة تعطيل الأنسجة نصف دورة في اتجاه عقارب الساعة وعكس اتجاه عقارب الساعة بشكل متكرر.
اغسل المصفاة بخمسة ملليلتر من الوسائط. ثم ، انقل تعليق الخلية إلى أنبوب مخروطي سعة 15 ملليلتر وجهاز طرد مركزي. بعد صب المادة الطافية ، أضف 500 ميكرولتر من محلول التحلل إلى الأنبوب لإزالة خلايا الدم الحمراء.
بعد دقيقة واحدة ، امزج الخلايا مع 9.5 ملليلتر من وسط R9. أجهزة الطرد المركزي الأنبوب. وصب الطافي جيدا.
بعد ذلك ، أعد تعليق حبيبات الخلية في 10 ملليلتر من وسط الاختيار السلبي الذي يحتوي على أجسام مضادة ل MHC2 و CD4 ، وضع الأنبوب في هزاز لمدة 30 دقيقة. بعد تكوير الخلايا عند 270 جرام لمدة خمس دقائق ، صب المادة الطافية. في وقت واحد في أنبوب مخروطي 15 ملليلتر ، اغسل 200 ميكرولتر من خرز الأغنام المضاد للفئران والغلوبولين المناعي G في سبعة ملليلتر في المتوسط.
ضع الأنبوب على مغناطيس ، وقم بإزالة الوسيط. بعد الغسيل مرتين أخريين ، أعد تعليق الخرزات في سبعة ملليلتر من وسط R9. ثم ، امزج سبعة ملليلتر من تعليق الخرزة مع حبيبات الخلية واحتضن الأنبوب على الروك.
لإزالة الخلايا المرتبطة بحبة الأجسام المضادة ، ضع الأنبوب المخروطي مباشرة على المغناطيس لمدة ثلاث دقائق. نضح معلق الخلية إلى أنبوب جديد سعة 15 ملليلتر ، مع إبقاء الأنبوب على المغناطيس. بيليه الخلايا الإيجابية CD8 المخصبة ، ويغسل ثلاث مرات في المتوسطة.
