لبدء ماصة 1.2 ملليلتر من ثقافة 24 ساعة من Pseudomonas aeruginosa في أنبوب طرد مركزي 1.5 ملليلتر. جهاز طرد مركزي الأنبوب عند 3000 جرام لمدة أربع درجات مئوية لمدة ثلاث دقائق. جمع طاف في أنبوب نظيف.
ماصة 333 ميكرولتر من الطافية في أنبوب نظيف. ثم أضف ملليلتر واحد من الأثير في الأنبوب. خلط الحل في دوامة لمدة 30 ثانية.
بعد أن تكون جميع الأنابيب دوامة ، قم بطردها عند 3000 جرام عند أربع درجات مئوية لمدة دقيقتين. ثم اجمع المرحلة العضوية وانقلها إلى أنبوب أنبوبي نظيف. ضع المحلول في شفاط الاستخراج حتى يجف.
بعد ذلك ، ضع قارورة نظيفة مغطاة بورق القصدير في الثلج لمدة خمس دقائق لتحضير محلول حمض الكبريتيك بنسبة 60٪. استخدم محلول حمض الكبريتيك هذا لتحضير كاشف الأورسينول. أضف 100 ميكرولتر من كل عينة من رامنوليبيد إلى أنبوب زجاجي وأضف 900 ميكرولتر من الأورسينول إلى العينات.
بعد خلط المحاليل معا ، احتضان العينة في حمام مائي عند 80 درجة مئوية لمدة 30 دقيقة. عندما يبرد الأنبوب إلى درجة حرارة الغرفة ، انقل عينة إلى خلية ربع لتر وضعها في مقياس الطيف الضوئي لقراءة الامتصاص عند 421 نانومتر. تنتج السلالة PA14 أكبر كمية من مكافئات الرامنوز بينما تنتج السلالة PA7 أقل كمية.
