نقل الخلايا HEK293T باستخدام كاشف نقل الدهون غير الشحمية لإنتاج فيروسات العدس

للبدء ، أضف مكونات الفيروسات العدسية في أنبوب سعة 15 ملليلتر ، واجعل الحجم يصل إلى 600 ميكرولتر باستخدام المخزن المؤقت EC. أضف 36 ميكرولترا من محلول المحسن ، وباستخدام ماصة سعة ملليلتر واحد ، اخلطها مرارا وتكرارا ، وقم بسحب وإطلاق جزء من السائل مرة أخرى في المحلول. بعد خمس دقائق ، أضف 120 ميكرولترا من كاشف النقل واخلطه حوالي 20 مرة ، كما هو موضح سابقا.

اترك الأنبوب في درجة حرارة الغرفة لمدة 10 دقائق. ثم أضف 5.2 ملليلتر من cDMEM إلى الأنبوب. باستخدام ماصة نقل يمكن التخلص منها ، أضف خليط النقل بالتنقيط إلى الخلايا HEK293T أحادية الطبقة المزروعة في دورق T175.

قم بتوزيع البلازميد بالتساوي من خلال حركة هزازة لطيفة من جانب إلى آخر للقارورة. احتضان الثقافة عند 37 درجة مئوية ، و 5 ٪ ثاني أكسيد الكربون لمدة 48 ساعة. بعد الحضانة تحت المجهر الفلوري ، تأكد من النقل الفعال للخلايا HEK293T من خلال مراقبة مضان GFP.

الآن قم بإمالة القارورة ، وباستخدام شريط مصلي سعة 25 ملليلتر ، اجمع الوسط دون إزعاج الطبقة الأحادية للخلية. انقل الوسيط إلى أنبوب سعة 50 ملليلتر المسمى مسبقا وأغلق الغطاء. أضف 25 مل من cDMEM الدافئ على طول جدران القارورة دون إزعاج الطبقة الأحادية ، وأعد القارورة إلى الحاضنة.

بعد 24 ساعة ، اجمع الوسيط ، وأضف محلول إزالة التلوث في القارورة ، وضعه أفقيا لمدة 24 ساعة القادمة.