للبدء ، ماصة واحد إلى ملليلتر من محلول الشطف المضاد للالتصاق إلى أنبوب مخروطي 15 ملليلتر. قم بتدوير الأنبوب لتغطية سطحه. بعد ذلك ، ماصة خمسة ملليلتر من محلول DPBS في الأنبوب بعد إزالة محلول مكافحة الالتصاق.
قم بتغطية الأنابيب المطلية لحين الحاجة. ماصة من أي وسط في لوحة تحتوي على القباب العضوية المعوية البشرية. باستخدام ماصة سعة ملليلتر واحد ، أضف ملليلترا واحدا من وسط DMEM / F-12 البارد إلى القبة مباشرة لفصلها عن اللوحة.
ماصة ملليلتر آخر من الوسط لحصاد أي عضويات متبقية. نقل التعليق إلى الأنابيب المخروطية المغلفة 15 ملليلتر. ماصة التعليق لأعلى ولأسفل لتفكيك المواد العضوية حتى يتم إنشاء تعليق شظية موحد مع حجم العضو المطلوب.
بعد ذلك ، ماصة من حصة التعليق للعد. ضع التعليق المتبقي على الجليد. ارسم شبكة XY في الجزء السفلي من كل بئر من لوحة مسطحة القاع 96 بئرا.
ماصة 50 ميكرولتر من DPBS في الآبار. نقل خمسة ميكرولتر من القسمة في كل بئر. احسب يدويا العدد الإجمالي للعضويات التي يتراوح قطرها من 50 إلى 200 ميكرومتر.
ثم استخدم المعادلة المعطاة لحساب حجم التعليق العضوي. بعد عد المواد العضوية ، قم بإزالة الطبقة الطافية والطبقة الغائمة من الأنبوب الذي يحتوي على تعليق الكتلة المتبقي. ثم ماصة ملليلتر من DMEM / F-12 البارد مباشرة على الحبيبات.
أجهزة الطرد المركزي التعليق عند 200 غرام لمدة خمس دقائق في درجة حرارة الغرفة. بالنسبة لنظام مشتق من ، أضف 40 ميكرولترا من الحبيبات العضوية المشتقة من الباردة. ماصة المواد العضوية لأعلى ولأسفل لتوزيعها في المصفوفة.
انقل خليط المصفوفة العضوي برفق إلى وسط صفيحة زراعة أنسجة معقمة ودافئة مسبقا مكونة من 24 بئرا. احتضن الطبق عند 37 درجة مئوية لمدة 30 دقيقة لضمان هلام القبة. بعد ذلك ، ماصة 0.5 ملليلتر من وسائط النمو العضوية المعوية الدافئة على جانبي البئر دون إزعاج القبة قبل الحضانة.
بالنسبة لنظام المصفوفة العضوية الخالية من xeno ، أضف 50 ميكرولترا من وسائط النمو العضوية 3X إلى الحبيبات الكروية. ثم ماصة 100 ميكرولتر من المصفوفة المحددة أربعة عضوي خال من xeno إلى التعليق. أضف 40 ميكرولترا من خليط هيدروجيل العضوي إلى وسط صفيحة زراعة الأنسجة المكونة من 24 بئرا.
احتضان اللوحة عند 37 درجة مئوية لمدة 30 دقيقة. بعد الحضانة ، ماصة 0.5 ملليلتر من وسائط النمو العضوية على طول جانبي البئر. ثم احتضان اللوحة مرة أخرى عند 37 درجة مئوية تحت مكملات ثاني أكسيد الكربون 5٪ و 95٪ رطوبة.
