للبدء ، اجمع المادة الطافية من مزرعة الخلايا الجذعية الوسيطة المشتقة من الدهون البشرية بمجرد أن تكون الخلايا متقاربة بنسبة 80٪. جمع طاف بعناية باستخدام ماصة ونقله إلى أنبوب الطرد المركزي 50 ملليلتر. قم بطرد الأنبوب عند 300 × جم لمدة 10 دقائق في درجة حرارة الغرفة لإزالة الخلايا العالقة ، ثم استخدم ماصة لجمع المادة الطافية دون إزعاج الحبيبات.
جهاز طرد مركزي للطاف عند 2000 × جم لمدة 10 دقائق عند أربع درجات مئوية لإزالة الحطام الخلوي. اجمع المادة الطافية الناتجة باستخدام ماصة وقم بترشيحها من خلال غشاء 0.22 ميكرون لإزالة الجسيمات الكبيرة وحطام الخلايا. إخضاع المرشح للطرد المركزي الفائق عند 10،000 × جم لمدة 30 دقيقة عند أربع درجات مئوية.
ثم قم بإجراء طرد مركزي نهائي عند 100،000 × جم لمدة 70 دقيقة عند أربع درجات مئوية. باستخدام ماصة ، قم بإزالة المادة الطافية دون جمع الحبيبات. أعد تعليق الحبيبات في برنامج تلفزيوني قبل الطرد المركزي للأنبوب عند 100،000 × جم لمدة 70 دقيقة عند أربع درجات مئوية.
قم بإزالة المادة الطافية وإعادة تعليق الحبيبات التي تم الحصول عليها من الحويصلات خارج الخلية ، أو EVs ، في ملليلتر واحد من PBS. أخيرا ، انقل تعليق EV إلى أنبوب طرد مركزي سعة ملليلتر واحد وقم بتخزينه عند أربع درجات مئوية حتى إجراء مزيد من التحليل. كشف المجهر الإلكتروني النافذ بوضوح عن الهيكل على شكل كوب للمركبات الكهربائية مع غشاء ثنائي الطبقة.
أشار تحليل تتبع الجسيمات النانوية إلى أن توزيع حجم الجسيمات يتراوح بين 50 و 150 نانومتر. أظهر تحليل اللطخة الغربية أن بروتينات العلامات المميزة للمركبات الكهربائية تم التعبير عنها بسلاسة.
