حصاد وبذر الخلايا البطانية الوريدية للوريد السري البشري (HUVECs) لنموذج الأمعاء البشرية على الرقاقة

للبدء ، قم بإعداد 1 إلى 100 تخفيف من محلول مخزون الكولاجين في DPBS مع المغنيسيوم والكالسيوم. أضف 350 ميكرولتر من محلول المخزون المخفف إلى الغرفة المعنية ، واحتضانها لمدة خمس دقائق في درجة حرارة الغرفة. اغسل جميع الغرف مرتين باستخدام 350 ميكرولتر من DPBS مع المغنيسيوم والكالسيوم لغسل الكولاجين المتبقي وحمض الخليك.

قم بإزالة المقابس من موقع واحد وقم بتبديلها إلى الجانب الآخر. بعد شطف الغرفة مرة أخرى ، أضف 350 ميكرولترا من وسط نمو الخلايا البطانية إليها. قم بإزالة المقابس من موقع واحد وقم بتبديلها إلى الجانب الآخر.

ثم أضف 350 ميكرولتر من وسط نمو الخلايا البطانية إلى كل غرفة. خذ HUVECs المزروعة في الممرات من واحد إلى ثلاثة مع التقاء 80٪ إلى 90٪ من الخلايا في وسط نمو الخلايا البطانية. ثم قم بإزالة وسط زراعة الخلايا من قارورة زراعة الخلايا T25 واغسل الخلايا برفق بثلاثة إلى خمسة ملليلتر من DPBS بدون المغنيسيوم والكالسيوم.

بمجرد إزالة المحلول، أضف ملليلترا واحدا من كاشف تفكك التربسين واحتضانه لمدة خمس دقائق عند 37 درجة سلزية حتى تنفصل الخلايا عن الدورق. انقل الخلايا المنفصلة إلى أنبوب باستخدام تسعة ملليلتر من 5٪ FBS في PBS بدون المغنيسيوم والكالسيوم. أجهزة الطرد المركزي في 350G لمدة خمس دقائق في درجة حرارة الغرفة.

بعد تحريك المادة الطافية ، أعد تعليق حبيبات الخلية في ملليلتر واحد من وسط نمو الخلايا البطانية. أضف حجم الخلايا المعنية إلى الغرفة ، واحتضن الرقائق الحيوية في حاضنة رطبة عند 37 درجة مئوية و 5٪ ثاني أكسيد الكربون. قم بإجراء تبادل متوسط للغرفة المحتوية على HUVECs مع 350 ميكرولتر من وسط نمو الخلايا البطانية بعد 24 ساعة.

إذا ظهرت فقاعات هواء في رقائق الموائع الدقيقة ، أغلق جميع منافذ الرقاقة الحيوية إلى جانب منافذ الغرفة المصابة. قم بإمالة الشريحة لتحريك فقاعة الهواء بالقرب من أحد طرفي التجويف. من منفذ الطرف الآخر ، ادفع 700 ميكرولتر من وسط زراعة الخلايا عبر الغرفة أثناء إمساك المقابس المقابلة.